[发明专利]一种同时测定鲜肉中多种呈味核苷酸的高效液相色谱方法与应用

权利要求书

1.一种同时测定鲜肉中多种呈味核苷酸的高效液相色谱方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样品前处理：在搅碎后的肉样中加入高氯酸溶液进行第一次提取，离心得上清液和固体残渣，固体残渣中加入高氯酸溶液进行第二次提取，离心，合并两次上清液，加入Na₂CO₃调节pH至5.0-7.0，然后加入磷酸缓冲液混匀得到待测样品；

(2)采用高效液相色谱方法测定待测样品中多种呈味核苷酸的含量：以流动相A和流动相B进行梯度洗脱，其中流动相A为甲醇，流动相B为磷酸缓冲液(PB)；流动相A与流动相B的体积之比为(2-8)：(92-98)，采用外标法分别得到肌苷酸(IMP)、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、肌苷(I)和次黄嘌呤(Hx)的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述高效液相色谱的色谱柱为ZORBAXSB-C₁₈，规格：4.6×250mm,5μm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述梯度洗脱的程序如下，其中流动相A和流动相B之间的比例为体积比：

0-2min：流动相A：流动相B＝2:98；

2-8min：流动相A：流动相B＝4:96；

8-12min：流动相A：流动相B＝6:94；

12-16min：流动相A：流动相B＝2:98。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述高效液相色谱的检测参数为：

检测波长为254nm；

柱温为28-32℃；

流动相流速为0.5-1.5mL/min；

进样体积为8-12μL；

优选地，柱温为30℃；流动相流速为1.0ml/min；进样体积为10μL。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述肉样为鸡肉冰鲜肉。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述第一次提取中肉样的质量与高氯酸的体积比为1g：3-6mL；所述第二次提取中肉样的质量与高氯酸的体积比为1g：1.5-2.5mL；所述高氯酸的浓度为0.6mol/L。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述第一次提取和第二次提取均是于超声波仪中超声10-20min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述离心时间为4-6min。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述Na₂CO₃溶液的浓度为0.5-0.7mol/L。

10.权利要求1-9任一项所述的方法在评定鲜肉新鲜度中的应用，其特征在于，所述应用的方法为：

采用肌苷酸(IMP)、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、肌苷(I)和次黄嘌呤(Hx)的含量分别计算K值和校正肌苷酸量，通过所述K值和所述校正肌苷酸量(IMPc)来评定鲜肉新鲜度；

其中，校正肌苷酸(IMPc)按以下公式计算：