[发明专利]一种同时测定鲜肉中多种呈味核苷酸的高效液相色谱方法与应用在审
申请号: | 201811087698.X | 申请日: | 2018-09-18 |
公开(公告)号: | CN109298086A | 公开(公告)日: | 2019-02-01 |
发明(设计)人: | 李瑞丽;陈庆隆;严寒;郑小明;刘清兰;郭孝培;昌晓宇 | 申请(专利权)人: | 江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所(江西省农业科学院农产品加工研究所) |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34 |
代理公司: | 南昌赣专知识产权代理有限公司 36129 | 代理人: | 张文宣 |
地址: | 330001 江西*** | 国省代码: | 江西;36 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 呈味核苷酸 高效液相色谱 高效液相色谱方法测定 高效液相色谱分离 高效液相色谱检测 应用 二磷酸腺苷 三磷酸腺苷 样品前处理 一磷酸腺苷 次黄嘌呤 待测样品 生产指导 重要意义 核苷酸 肌苷酸 质量控制 肌苷 评定 参考 分析 | ||
1.一种同时测定鲜肉中多种呈味核苷酸的高效液相色谱方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)样品前处理:在搅碎后的肉样中加入高氯酸溶液进行第一次提取,离心得上清液和固体残渣,固体残渣中加入高氯酸溶液进行第二次提取,离心,合并两次上清液,加入Na2CO3调节pH至5.0-7.0,然后加入磷酸缓冲液混匀得到待测样品;
(2)采用高效液相色谱方法测定待测样品中多种呈味核苷酸的含量:以流动相A和流动相B进行梯度洗脱,其中流动相A为甲醇,流动相B为磷酸缓冲液(PB);流动相A与流动相B的体积之比为(2-8):(92-98),采用外标法分别得到肌苷酸(IMP)、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、肌苷(I)和次黄嘌呤(Hx)的含量。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)所述高效液相色谱的色谱柱为ZORBAXSB-C18,规格:4.6×250mm,5μm。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)所述梯度洗脱的程序如下,其中流动相A和流动相B之间的比例为体积比:
0-2min:流动相A:流动相B=2:98;
2-8min:流动相A:流动相B=4:96;
8-12min:流动相A:流动相B=6:94;
12-16min:流动相A:流动相B=2:98。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)所述高效液相色谱的检测参数为:
检测波长为254nm;
柱温为28-32℃;
流动相流速为0.5-1.5mL/min;
进样体积为8-12μL;
优选地,柱温为30℃;流动相流速为1.0ml/min;进样体积为10μL。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)所述肉样为鸡肉冰鲜肉。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)所述第一次提取中肉样的质量与高氯酸的体积比为1g:3-6mL;所述第二次提取中肉样的质量与高氯酸的体积比为1g:1.5-2.5mL;所述高氯酸的浓度为0.6mol/L。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)所述第一次提取和第二次提取均是于超声波仪中超声10-20min。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)所述离心时间为4-6min。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)所述Na2CO3溶液的浓度为0.5-0.7mol/L。
10.权利要求1-9任一项所述的方法在评定鲜肉新鲜度中的应用,其特征在于,所述应用的方法为:
采用肌苷酸(IMP)、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、肌苷(I)和次黄嘌呤(Hx)的含量分别计算K值和校正肌苷酸量,通过所述K值和所述校正肌苷酸量(IMPc)来评定鲜肉新鲜度;
其中,校正肌苷酸(IMPc)按以下公式计算:
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