[发明专利]一种同时测定鲜肉中多种呈味核苷酸的高效液相色谱方法与应用在审
申请号: | 201811087698.X | 申请日: | 2018-09-18 |
公开(公告)号: | CN109298086A | 公开(公告)日: | 2019-02-01 |
发明(设计)人: | 李瑞丽;陈庆隆;严寒;郑小明;刘清兰;郭孝培;昌晓宇 | 申请(专利权)人: | 江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所(江西省农业科学院农产品加工研究所) |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34 |
代理公司: | 南昌赣专知识产权代理有限公司 36129 | 代理人: | 张文宣 |
地址: | 330001 江西*** | 国省代码: | 江西;36 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 呈味核苷酸 高效液相色谱 高效液相色谱方法测定 高效液相色谱分离 高效液相色谱检测 应用 二磷酸腺苷 三磷酸腺苷 样品前处理 一磷酸腺苷 次黄嘌呤 待测样品 生产指导 重要意义 核苷酸 肌苷酸 质量控制 肌苷 评定 参考 分析 | ||
本发明涉及鲜肉质量控制领域,主要涉及一种同时测定鲜肉中多种呈味核苷酸的高效液相色谱方法与应用。本发明公开了一种同时测定鲜肉中多种呈味核苷酸的高效液相色谱方法,主要包括:(1)样品前处理;(2)采用高效液相色谱方法测定待测样品中各呈味核苷酸的含量,高效液相色谱分离分析肉样中肌苷酸(IMP)、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、肌苷(I)、次黄嘌呤(Hx)六种核苷酸的含量。本发明还公开了这种高效液相色谱检测方法在评定鲜肉新鲜度中的应用。这对冰鲜肉市场的发展具有重要意义,既能为消费者提供评价鲜肉新鲜度的参考,又能为冰鲜肉开发商提供生产指导,具有较强的理论价值和实践意义。
技术领域
本发明涉及鲜肉质量控制领域,主要涉及一种同时测定鲜肉中多种呈味核苷酸的高效液相色谱方法与应用。
背景技术
目前市场上销售的肉类一般分为热鲜肉、冰鲜肉和冷冻肉三种。冰鲜肉是一种新的产品形态,是指将屠宰后得畜胴体迅速冷却,然后在0-4℃保藏的生鲜肉。它具有安全、卫生及肉嫩味美的优点,但在我国上市后其市场占有率和知名度都不高。究其原因,主要是因为行业内缺少耳熟能详的产品品牌和企业品牌,缺乏冰鲜肉营养及风味的评价标准,因此消费者对冰鲜肉的风味存在疑虑,导致对冰鲜肉的接受度不够,在一定程度上限制了冰鲜肉市场的扩大。
现已明确鲜味氨基酸中谷氨酸钠和呈味核苷酸是动物组织中重要的鲜味物质,其中呈味核苷酸中的肌苷酸(IMP)增加鲜味的能力较谷氨酸钠强40倍。Hiromichi等人研究表明,新鲜鸡肉、猪肉和牛肉及各自的肉汤中,IMP含量是游离谷氨酸含量的10倍,可见畜禽肉中的鲜味物质主要是IMP。动物屠宰后,肌肉组织中IMP主要来自高能磷酸化合物的降解,其主要产生过程为:ATP在ATP酶作用下降解产生ADP,在腺苷酸激酶作用下ADP生成AMP,经脱氨酶作用下生产肌苷酸,肌苷酸降解产生肌苷和次黄嘌呤。
因此,亟需寻找一种对冰鲜肉所含的多种呈味核苷酸进行分析并对其鲜度进行评价的方法。
发明内容
鉴于现有技术中的不足之处,本发明的目的在于提供一种同时测定鲜肉中多种呈味核苷酸的高效液相色谱方法与应用,包括样品前处理、和高效液相色谱检测。该检测方法对各呈味核苷酸能很好的分离,能够同时检测肌苷酸(IMP)、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、肌苷(I)和次黄嘌呤(Hx)的含量,具有操作方便,快速且精确度高的优点。将上述方法检测到的各种呈味核苷酸计算得到校正肌苷酸和K值用于评定鲜肉的新鲜度,能更加客观地对鲜肉中新鲜度进行判断。
为了达到上述目的,本发明采用的技术方案如下:
一种同时测定鲜肉中多种呈味核苷酸的高效液相色谱方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)样品前处理:在搅碎后的肉样中加入高氯酸溶液进行第一次提取,离心得上清液和固体残渣,固体残渣中加入高氯酸溶液进行第二次提取,离心,合并两次上清液,加入Na2CO3调节pH至5.0-7.0,然后加入磷酸缓冲液混匀得到待测样品;
(2)采用高效液相色谱方法测定待测样品中多种呈味核苷酸的含量:以流动相A和流动相B进行梯度洗脱,其中流动相A为甲醇,流动相B为磷酸缓冲液(PB);流动相A与流动相B的体积之比为 (2-8):(92-98),采用外标法分别得到肌苷酸(IMP)、三磷酸腺苷 (ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、肌苷(I)和次黄嘌呤(Hx)的含量。
优选地,步骤(2)所述高效液相色谱的色谱柱为ZORBAX SB-C18,规格:4.6×250mm,5μm。
优选地,步骤(2)所述梯度洗脱的程序如下,其中流动相A和流动相B之间的比例为体积比:
0-2min:流动相A:流动相B=2:98;
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