[发明专利]一种山茶属植物高效体细胞胚发生和植株再生的方法

权利要求书

1.一种山茶属植物高效体细胞胚发生和植株再生的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、体细胞胚诱导：从保存培养基上，选取茶树、油茶或红山茶组培苗，切除3/4叶片，以带1/4叶片的茎段作为外植体，接种到体细胞胚诱导培养基上，在24～26℃、光照条件下培养8～12周，茎节及叶柄处形成体细胞胚；所述保存培养基以MS培养基为基本培养基，并添加蔗糖20～40g/L和琼脂8g/L，pH为5.8～6.0；所述体细胞诱导培养基以MS培养基为基本培养基，并添加6-苄基氨基腺嘌呤(6-BA)1.0～2.0mg/L、蔗糖20～40g/L和琼脂8g/L，pH为5.8～6.0；

S2、体细胞胚增殖：选取步骤S1中形成的体细胞胚，切片，将切片平铺至体细胞胚增殖培养基上，在24～26℃、光照条件下培养8周，在切片周边及表面形成新的体细胞胚；所述体细胞胚增殖培养基以MS培养基为基本培养基，添加噻苯隆(TDZ)0～0.1mg/L、蔗糖20～40g/L和琼脂8g/L，pH为5.8～6.0；

S3、植株再生：选取步骤S2培养得到的体细胞胚转移至植株再生培养基上，在24～26℃、光照条件下培养8～12周，由体细胞胚再生出完整小植株；所述植株再生培养基以1/4MS培养基为基本培养基，并添加蔗糖20～40g/L和琼脂8g/L，pH为5.8～6.0。

2.根据权利要求1所述的山茶属植物高效体细胞胚发生和植株再生的方法，其特征在于，步骤S1中的组培苗为继代培养4～6周的茶树、油茶或红山茶组培苗。

3.根据权利要求1所述的山茶属植物高效体细胞胚发生和植株再生的方法，其特征在于，所述体细胞诱导培养基中含6-苄基氨基腺嘌呤(6-BA)1.5mg/L。

4.根据权利要求1所述的山茶属植物高效体细胞胚发生和植株再生的方法，其特征在于，步骤S1中，作为外植体的茎段的长度为0.5～1.5cm，且带有一个节。

5.根据权利要求1所述的山茶属植物高效体细胞胚发生和植株再生的方法，其特征在于，步骤S1中，作为外植体的茎段45度角斜插于所述体细胞胚诱导培养基上。

6.根据权利要求1所述的山茶属植物高效体细胞胚发生和植株再生的方法，其特征在于，步骤S1中，光照条件为：光照强度为10μmol m^–2s^–1，每日光照12小时，黑暗12小时；步骤S2和步骤S3中，光照条件均为：光照的强度为54μmol m^–2s^–1，每日光照12小时，黑暗12小时。

7.根据权利要求1所述的山茶属植物高效体细胞胚发生和植株再生的方法，其特征在于，步骤S2和步骤S3中，选取的体细胞胚的直径为10～12mm。

8.根据权利要求1所述的山茶属植物高效体细胞胚发生和植株再生的方法，其特征在于，步骤S2中，用手术刀将体细胞胚切成厚度为1～5mm的切片。

9.根据权利要求8所述的山茶属植物高效体细胞胚发生和植株再生的方法，其特征在于，步骤S2中，用手术刀将体细胞胚切成厚度为2mm的切片。

10.根据权利要求1所述的山茶属植物高效体细胞胚发生和植株再生的方法，其特征在于，步骤S2中，所述体细胞胚增殖培养基中含有所述噻苯隆(TDZ)0.05mg/L。