[发明专利]一种副猪嗜血杆菌培养基及高密度发酵培养方法有效
| 申请号： | 201811088534.9 | 申请日： | 2018-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN109207397B | 公开（公告）日： | 2020-07-28 |
| 发明（设计）人： | 程立坤;李峰;林初文;沈志强;付强;李书光 | 申请（专利权）人： | 山东省滨州畜牧兽医研究院;山东绿都生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12R1/01 |
| 代理公司： | 济南舜源专利事务所有限公司 37205 | 代理人： | 于晓晓 |
| 地址： | 256600 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 嗜血 杆菌 培养基 高密度 发酵 培养 方法 | ||
1.一种副猪嗜血杆菌高密度发酵培养方法，其特征在于：包括下列步骤：
(1)挑取副猪嗜血杆菌单菌落接种至种子培养基容器中，培养条件为：温度35～39℃，搅拌转速150～200rpm，培养时间10～14h；
(2)按照体积分数10％的接种量将步骤(1)中种子液接种至装有发酵培养基的发酵罐中，培养温度35～39℃；溶氧水平维持在15～25％，pH维持在7.2～7.8，在发酵过程中，葡萄糖浓度维持在0.8～1.2g/L，且血清浓度维持在2.5～3.5％；为保证血清浓度维持在2.5～3.5％，发酵过程中血清补加速率根据发酵电容值变化量确定，血清添加量与电容值的线性关系为y＝105.26x，其中y：血清添加量mL/L、x：电容值pF/cm，根据电容值变化量计算血清消耗速率，实时调节血清补加速率从而将血清浓度维持在2.5～3.5％；所述发酵培养基为副猪嗜血杆菌培养基，包括以下组份：按照重量/体积计，葡萄糖2.0～3.0g/L，蛋白胨8.5～13.0g/L，酵母粉7.5～12.5g/L，K2HPO4 1.5～3.0g/L，NaCl 3.5～7.0g/L，三甲基甘氨酸1.0～2.5g/L，氯化胆碱0.5～1.5mL/L，VB1 25.0～35.0mg/L，VH 8.5～12.0mg/L，NAD 45～55mg/L；按照体积比计，2.0～4.0％牛血清，余量为水。
2.根据权利要求1所述的副猪嗜血杆菌高密度发酵培养方法，其特征在于：所述发酵培养基，按照重量/体积计，葡萄糖2.5g/L，蛋白胨10.0g/L，酵母粉10.0g/L，K2HPO4 2.5g/L，NaCl 5.0g/L，三甲基甘氨酸1.5g/L，氯化胆碱1.0mL/L，VB1 30.0mg/L，VH 10.0mg/L，NAD50mg/L；按照体积比计，3.0％牛血清，余量为水。
3.根据权利要求1所述的副猪嗜血杆菌高密度发酵培养方法，其特征在于：所述发酵过程中，细胞菌体浓度和电容值线性方程为：y＝8.7459x，其中，y：菌体浓度，OD600、x：电容值，pF/cm，活细胞浓度与活菌数目该线性方程为：y＝1.8417x，其中，y：活菌数目x109CFU/mL、x：细胞菌体浓度OD600；R2＝0.9963，血清添加量与副猪嗜血杆菌活菌数目线性方程为：y＝0.153x，其中，y：活菌数目、x1012 CFU/L、x：血清添加量，mL/L；R2＝0.9952。
4.根据权利要求1所述的副猪嗜血杆菌高密度发酵培养方法，其特征在于：培养温度为37℃、溶氧水平维持在20％。
5.根据权利要求1所述的副猪嗜血杆菌高密度发酵培养方法，其特征在于：pH维持在7.5、葡萄糖浓度维持在1.0g/L。
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