[发明专利]一种高通量研究水稻转录因子的方法

权利要求书

1.一种高通量研究水稻转录因子的方法，其特征在于，包括两部分：

(1)水稻转录因子库的构建；

(2)一对一mating筛选。

2.根据权利要求1所述的水稻转录因子库的构建，其特征在于，包括以下4个步骤：

(1)设计引物利用PCR扩增将1800个水稻转录因子从cDNA或T载体上扩增出来；

(2)将扩增出来的转录因子片段连接到表达载体上，然后转入大肠杆菌感受态细胞进行扩大培养，获得连接入水稻转录因子序列的质粒；

(3)将获得的质粒转入酵母感受态细胞中；

(4)鉴定验证阳性克隆，将正确的克隆转入深孔板扩大培养，每一个孔是一个水稻转录因子。

3.根据权利要求2所述的水稻转录因子库的构建，其特征在于，步骤(1)所设计的引物序列必须保证与所用载体序列同框表达，不局限于在起始密码子位置开始扩增。

4.根据权利要求2所述的水稻转录因子库的构建，其特征在于，步骤(1)引物设计时需增加同源重组序列或相应的酶切位点序列，PCR扩增所使用的模板包括质粒及水稻cDNA。

5.根据权利要求2所述的水稻转录因子库的构建，其特征在于，步骤(2)重组实验中使用线性化的酵母pGADT7载体。

6.根据权利要求2所述的水稻转录因子库的构建，其特征在于，步骤(3)经一代测序验证后带有正确的转录因子序列的载体质粒转入Y187的酵母感受态菌株中。

7.根据权利要求2所述的水稻转录因子库的构建，其特征在于，步骤(4)采用96孔深孔板培养酵母菌文库，用以实现高通量筛选的目的。

8.根据权利要求1所述的一对一mating筛选，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将诱饵基因连入目的载体中，再将载体转入酵母感受态细胞中进行扩大培养，得到菌液；

(2)活化1800个转录因子酵母库，以及含有诱饵质粒的酵母菌，在96孔深孔板中等量混匀进行mating；

(3)培养过后用12连排枪将菌液点在筛选板上培养；

(4)培养3-4天，观察并记录实验结果。

9.根据权利要求8所述的一对一mating筛选，其特征在于，步骤(1)中使用pHisi-1酵母载体。

10.根据权利要求8所述的一对一mating筛选，其特征在于，步骤(1)使用的酵母感受态菌株是YM4271。