[发明专利]化学物诱发人食管癌的体外检测模型的建立方法

说明书

本发明公开了一种化学物诱发人食管癌的体外检测模型的建立方法，包括以下步骤：提供接种在体外培养容器中的人食管上皮细胞；对所述人食管上皮细胞分别施加预定浓度范围内的多个浓度的待检化学物后培养预定时间，测定所述人食管上皮细胞的细胞活力随所述待检化学物施加浓度的变化的曲线；选取所述曲线中的预定细胞活力范围对应的所述待检化学物的浓度区间作为致癌测定浓度区间，选取所述致癌测定浓度区间的多个浓度作为致癌测定浓度；以及对所述人食管上皮细胞分别施加所述致癌测定浓度的所述待检化学物，进行所述待检化学物对所述人食管上皮细胞的致癌实验检测。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种化学物诱发人食管癌的体外检测模型的建立方法。

背景技术

癌症发生通常是遗传因素与环境因素交互作用的结果，一般认为90％的人类癌症均与环境因素有关，其中主要是化学物因素，占90％以上。目前，啮齿类动物长期致癌试验是唯一被各国监管机构接受的化学物致癌性标准评价方法。虽然其他试验方法如构效关系分析、遗传毒性试验、体外细胞转化试验和人群肿瘤流行病学调查等用于化学物致癌作用的评价，但还没有一种理想的测试系统能够代替啮齿类动物致癌试验。化学物是诱发人食管癌的主要因素，目前基于化学物对人食管癌的研究主要基于动物实验。基于动物实验的致癌试验研究耗时长、投入大，不利于高通量检测大量化学物的毒性。另一方面，现行的致癌性动物试验在应用于化学物安全毒理学评价时也存在很多局限性，主要体现在：动物染毒剂量远远高于人体实际暴露水平；小数量实验动物到大量人群的致癌性具有极大的不确定性；无法测定化合物的混合暴露和交互作用等。

近几十年来，随着实验动物使用的替代、减少、优化“几十年原则的倡导与实施以及生物医学研究模式的转变，替代动物实验的体外模型研究已成为毒理学发展的重要方向，基于人源细胞的、以毒性通路为核心的转化毒理学研究得到学术界、工业界及监管机构的广泛关注。目前的毒理学试验体外替代方法在急性毒性试验如皮肤刺激试验等得到了应用，但是在慢性毒性和致癌试验或观察复杂效应终点时遇到困难。因此，缺乏高效、准确的体外实验方法来明确化学物与诱发人食管癌的关系。

发明内容

基于此，有必要提供一种化学物诱发人食管癌的体外检测模型的建立方法，用于高效、准确的检测化学物与诱发人食管癌的关系。

一种化学物诱发人食管癌的体外检测模型的建立方法，包括以下步骤：

提供接种在体外培养容器中的人食管上皮细胞；

对所述人食管上皮细胞分别施加预定浓度范围内的多个浓度的待检化学物后培养预定时间，测定能够反映所述人食管上皮细胞的细胞活力随所述待检化学物施加浓度的变化的曲线；

选取所述曲线中的预定细胞活力范围对应的所述待检化学物的浓度区间作为致癌测定浓度区间，选取所述致癌测定浓度区间的多个浓度作为致癌测定浓度；以及

对所述人食管上皮细胞分别施加所述致癌测定浓度的所述待检化学物，进行所述待检化学物对所述人食管上皮细胞的致癌实验检测。

在其中一个实施例中，所述人食管上皮细胞在所述培养容器中的接种浓度为8×10⁴/ml～2×10⁵/ml。

在其中一个实施例中，所述预定浓度范围的最低浓度为0～100nmol/L，所述预定浓度范围的最高浓度为10mmol/L～100mmol/L。

在其中一个实施例中，所述预定细胞活力范围内的最低细胞活力为90％～95％。

在其中一个实施例中，所述预定浓度范围内的多个浓度为等比数列。

在其中一个实施例中，所述多个致癌测定浓度为等比数列。