[发明专利]一种检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体的胶体金检测卡

权利要求书

1.一种检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体检测卡，包括外壳（1）和置于外壳内的试纸条（2），所述外壳（1）上开有观测窗（11）和加样孔（12）；所述试纸条（2）由样品垫（21）、金标垫（22）、硝酸纤维素膜（23）、吸收垫（24）顺次搭接粘贴在PVC底板（25）上构成，确保接头处有叠压，使层析能顺利进行；其中所述金标垫（22）上结合有金标E蛋白和金标羊抗鼠IgG，所述硝酸纤维素膜上有一条含有鸭坦布苏病毒E蛋白的T线（26）和另一条含有鼠IgG的C线（27）；

包括以下步骤：

（1）金标羊鼠IgG的制备：将羊抗鼠IgG加入胶体金溶液中，用0.1mol/L的K₂CO₃溶液调节pH值至6.7；

（2）金标E蛋白的制备：将E蛋白加入胶体金溶液中，用0.1mol/L的K₂CO₃溶液调节pH值至6.8；

（3）硝酸纤维素膜的制备：用E蛋白和鼠IgG分别在层析膜上划线（0.9-1.1mm）作为T线和C线，T线和C线间距约为7mm，冻干并4℃保存；

（4）胶体金溶液的制备：在超纯水中加入1％氯金酸，加热煮沸，迅速加入1％柠檬酸三钠，继续煮沸15分钟，所述超纯水、氯金酸、柠檬酸三钠的体积比为99：1：1，冷却后用超纯水恢复至原来的体积，4℃保存备用；

（5）金标垫的制备：免疫胶体金溶液均匀铺至金标垫，37℃作用2h，冻干并4℃保存；

（6）组装检测卡：将吸水滤纸职称的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫依次贴到一张带不干胶的PVC底板上，组装成试纸条，然后将试纸条装入外壳，组装成检测卡。

2.根据权利要求1所述的检测卡，其特征在于：所述E蛋白由鸭坦布苏病毒CQW1株经原核表达系统体外诱导表达并纯化所得，其蛋白分子量大小约65KD。

3.根据权利要求1所述的检测卡，其特征在于：所以免疫胶体金溶液的纯化方法如下：采用低温高速离心法除去未标记的蛋白、未充分标记的金颗粒和标记过程中可能形成的各种聚合物，以达到金标复合物的纯化，然后用金标复合物稀释液混悬两种金标复合物的沉淀至原体积的10%，分装，4℃保存备用。

4.一种根据权利要求1~3任意所述的检测卡在检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体中的应用。

5.一种根据权利要求4所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：采用权利要求1~3任一项所述的胶体金检测卡，将血清样品经加样孔滴加到样品垫上，通过微孔滤膜的渗滤浓缩和毛细作用，样品在层析纸条上前移，并与金标垫上的免疫胶体金反应，形成“金标E蛋白-抗体”复合物；当T线和C线均显色时，结果为阳性；仅C线显色时，结果为阴性；当T线和C线均不显色，考虑检测卡失效。