[发明专利]一种检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体的胶体金检测卡

说明书

本发明公开了一种检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体检测卡及其制备方法。采用双抗原夹心法的原理，基于胶体金免疫层析技术而制成，该胶体金检测卡包括加样孔、观测窗、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫、PVC底板，在所述金标垫上结合有金标E蛋白和金标羊抗鼠IgG，硝酸纤维素膜上有一条含有鸭坦布苏病毒E蛋白的检测线（T线）和另一条含有鼠IgG的质控线（C线）。本发明用于检测鸭坦布苏病毒感染情况及鸭坦布苏病毒流行情况的监测，相比现有的检测方法，价格低廉，简便快捷，结果判断直观，灵敏准确，可有效避免钩状效应，同时保证假阳性被剔除而弱阳性不漏检，更便于现场检测。

技术领域

本发明涉及兽医生物技术领域，具体涉及一种检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体的胶体金检测卡。

背景技术

2010年以来，我国多数水禽养殖区的鸭群陆续感染了鸭坦布苏病毒（duckTembusu virus， DTMUV）。DTMUV是我国首次发现对鸭致病的新型黄病毒，在此之前，尚未有黄病毒大规模感染鸭的报道。DTMUV的感染可引起雏鸭死亡、肉鸭生长迟缓、蛋鸭产蛋下降甚至停产，且多数病鸭伴有脑炎样神经症状；剖检感染鸭，可见卵巢出血、充血，卵泡破裂萎缩，脑组织病变、水肿等特征，因此，DTMUV感染引起的疾病又称“鸭黄病毒病”、“鸭出血性卵巢炎”或“鸭产蛋下降-死亡综合征”等。该病原传播迅速，呈现出全国流行趋势，目前我国华东、华中和华北等地区均已分离得到该病原；易感对象广，可感染北京鸭、樱桃谷鸭、绍兴鸭等我国的主要养殖品种，发病率高达100%，死亡率在5%~30%之间，淘汰率为10~80%，给我国养鸭业造成了重大经济损失。

目前，对于DTMUV病原的检测方法主要有病毒分离鉴定和分子生物学检测。病毒分离鉴定是最传统的病原学诊断方法，DTMUV可从病死鸭的卵泡膜、脑、脾脏和肝脏等病变组织中分离。分子生物学检测方法特异性强、敏感性高，是医学检验的重要手段，因此，针对检测DTMUV抗原的相关方法如RT-PCR、套式PCR、荧光定量RT-PCR、RT-LAMP得到相继研究。而对于DTMUV特异性抗体的检测主要是血清学方法，目前关于检测DTMUV抗体的血清学研究试验主要有病毒中和试验、酶联免疫吸附试验和乳胶凝集试验等。CN102925585A公开了一种鸭坦布苏病毒检测试剂盒，该发明简化了操作步骤，缩短了反应时间，降低了污染几率，并能提高检测的准确度和速度，但一个检测反应需要约2小时内，耗时较长。CN103993105A公开了一种鸭坦布苏病毒和禽流感病毒多重PCR检测试剂盒，该发明所采用的技术手段为三对特异性引物的碱基序列组成，该方法操作复杂，需要的引物多，同时对操作人员的技术要求高，在基层实验室的推广受阻，在临床的快速检测方面具有一定局限性。虽然目前有大量以胶体金技术作为免疫学技术领域、药物领域的检测发明，但国内外尚无使用该技术对鸭坦布苏病毒监控的报道。

基于上述分析，一种技术成本低，简便快捷，无需特殊设备和专业技术人员，结果判断直观，灵敏准确、稳定性好的检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体的胶体金检测卡是行业内急需的。

发明内容

鉴于上述不足，本发明的目的在于提供一种检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体的胶体金检测卡及其制备方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案，本发明各组分的用量也是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分和配伍制备出的检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体的胶体金检测卡均具有良好的效果：

一种检测鸭坦布苏病毒E蛋白抗体检测卡，包括外壳（1）和置于外壳内的试纸条（2），所述外壳（1）上开有观测窗（11）和加样孔（12）；所述试纸条（2）由样品垫（21）、金标垫（22）、硝酸纤维素膜（23）、吸收垫（24）顺次搭接粘贴在PVC底板（25）上构成，确保接头处有叠压，使层析能顺利进行；其中所述金标垫（22）上结合有金标E蛋白和金标羊抗鼠IgG，所述硝酸纤维素膜上有一条含有鸭坦布苏病毒E蛋白的T线（26）和另一条含有鼠IgG的C线（27）；

包括以下步骤：