[发明专利]一种基于多支杂交链式反应的核酸检测方法及应用有效
申请号: | 201811094567.4 | 申请日: | 2018-09-19 |
公开(公告)号: | CN109321635B | 公开(公告)日: | 2022-06-14 |
发明(设计)人: | 周国宝;李蕾;卢星 | 申请(专利权)人: | 嘉兴学院 |
主分类号: | C12Q1/6816 | 分类号: | C12Q1/6816 |
代理公司: | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人: | 韩聪 |
地址: | 314001 *** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 杂交 链式反应 核酸 检测 方法 应用 | ||
1.一种基于多支杂交链式反应的生物靶标分子检测传感器,所述生物靶标分子经预处理后得到包含a序列的目标DNA,其特征在于,所述生物靶标分子检测传感器包括发夹探针H1、H2、H3,
H1包括H1b、H1a’、H1c三个部分,H1a’为a序列的互补序列,H1b包括b1和b2,H1c包括c1和c2,b2与c2互补成双链作为H1发夹结构的茎部,H1a’和c1作为发夹结构的环部,b2的长度小于H1a’;
H2包括H2b’、H2d、H2c’三个部分,H2b’包括b2’和b1’,H2c’包括c2’和c1’,b2’与c2’互补成双链作为H2发夹结构的茎部,b1’和H2d作为发夹结构的环部,H2b’与H1b互补,H2c’与H1c互补,H2d为目标DNA互补链以外的一段碱基序列;
H3包括H3e、H3f、H3e’、H3g四个部分,其中H3e与H3e’互补成双链作为H3发夹结构的茎部,H3f形成发夹结构的环部,H3g为H3的3’端单链粘性末端,H3e’和H3g与H2d互补;
H1b、H1a’、H2d序列长度均为18-28bp;所述H2或H3上修饰有信号标记;
还包括金界面上自组装有DNA探针的电极或芯片,所述DNA探针具有与H3的H3f及H3e的部分序列互补配对的序列;
利用所述生物靶标分子检测传感器的核酸检测方法,包括以下步骤:
(1)将待测样本预处理得到含有目标DNA的溶液,所述目标DNA包含a序列;
(2)合成所述发夹探针;
(3)基于多支杂交链式反应进行核酸检测:往含有目标DNA的溶液中加入H1、H2、H3,混合,室温下反应,形成多支杂交链反应产物,再将金界面上自组装有DNA探针的载体置于反应溶液中,DNA探针与H3杂交将多支杂交链反应产物捕获到金界面上;然后分析金界面上的信号标记变化测定溶液中目标DNA的含量,进而计算出待测样本中目标物的含量。
2.如权利要求1所述的生物靶标分子检测传感器,其特征在于,所述的待测样本为DNA、RNA、药物/生物小分子、抗原/抗体、酶、外泌体或肿瘤细胞。
3.如权利要求1所述的生物靶标分子检测传感器,其特征在于,步骤(1)中,所述的含有目标DNA的溶液的缓冲体系为SPSC溶液。
4.如权利要求1所述的生物靶标分子检测传感器,其特征在于,H1b、H1a’、H2d序列长度均为24bp,其中b1、c1、b1’、c1’为6bp,b2、c2、b2’、c2’为18bp;H3由两个18个碱基的茎部H3e、H3e’,8个碱基的环部H3f和6个碱基的粘性末端H3g组成。
5.如权利要求1所述的生物靶标分子检测传感器,其特征在于,所述H2或H3的5’端标记有生物素或荧光基团。
6.如权利要求1所述的生物靶标分子检测传感器,其特征在于,H1、H2、H3的工作浓度为1nM-100μM。
7.如权利要求1所述的生物靶标分子检测传感器,其特征在于,还包括用于辅助目标DNA打开H1发夹结构的辅助链,所述H1的3’端具有单链粘性末端H1x,所述辅助链与H1x及H1c的部分序列互补。
8.如权利要求1所述的生物靶标分子检测传感器,其特征在于,所述的DNA探针为锁核酸探针或肽核酸探针。
9.如权利要求1所述的生物靶标分子检测传感器,其特征在于,当目标DNA为p53基因中的Exon-5时,H1的序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示,H2的序列如SEQID NO.4所示,H3的序列如SEQ ID NO.5所示;
当目标DNA为p53基因中的Exon-6时,H1的序列如SEQ ID NO.6所示,H2的序列如SEQ IDNO.4所示,H3的序列如SEQ ID NO.5所示。
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