[发明专利]禽流感病毒血凝素抗原及其制备方法、应用和禽流感疫苗

说明书

本发明提供了一种禽流感病毒血凝素抗原及其制备方法、应用和禽流感疫苗，涉及生物技术领域。该禽流感病毒血凝素抗原为具有如SEQ ID NO.1所示序列表达的血凝素蛋白，同时为哺乳动物表达系统表达的蛋白，兼具广谱性和良好的免疫原性，免疫禽类后可产生较高滴度的抗体并且预防多种亚型的禽流感。该禽流感病毒血凝素抗原的制备方法可以获得具有广谱性和抗原免疫原性好的血凝素蛋白，并且该方法操作简单，适合规模化生产。包含该禽流感病毒血凝素抗原的疫苗生产成本低，免疫效力高，免疫3‑4周龄SPF鸡后，14日即可检测到H5亚型抗原测定HI抗体几何平均滴度(GMT)均不低于1:64，优于常规疫苗。

技术领域

本发明涉及生物术领域，尤其是涉及一种禽流感病毒血凝素抗原及其制备方法、应用和禽流感疫苗。

背景技术

禽流感病毒(AIV)为单股负链病毒，呈球形或丝状，球形直径80-120nm。基因组分为8个节段，共编码10种蛋白，其中HA、NA和M位于病毒的囊膜表面，是AIV的主要保护性抗原。位于病毒双层脂包膜下是基质蛋白M，它是病毒颗粒中含量最多的蛋白，其构成了病毒包膜的框架。在脂质双层膜上则镶嵌了两种由病毒基因编码的糖蛋白刺突，即血凝素(Hemagglutinnin，HA)与神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)，两者是划分流感病毒亚型的依据，且其抗原性极易变异，一旦形成新的亚型，极易导致禽流感的爆发。

HA是构成病毒囊膜纤突的主要成分，属于Ⅰ型糖蛋白。HA以三聚体的形式存在。HA在病毒吸附、穿模以及决定病毒与细胞融合等方面均起关键作用。它能否被裂解为HA1和HA2两部分是病毒致病力高低的重要因素。AIV感染后可以产生抗HA抗体，HA抗体是主要的保护性抗体，在防止病毒感染中起重要作用。HA蛋白是禽流感流感病毒的主要保护性抗原之一。它不仅可以刺激机体产生保护性抗体，而且可以诱导机体产生细胞毒性作用，对同一亚型病毒的共计产生良好的保护力。

2003年初至今，H5N1亚型高致病性禽流感在欧洲、非洲、美洲和亚洲的禽类中，发生过大面积流行并造成了重大的经济损失。目前禽流感灭活疫苗应用鸡胚或MDCK全悬浮细胞生产，应用鸡胚生产疫苗工艺复杂，使用的鸡胚可能存在外源病毒的污染，需要将毒液接种鸡胚、收取尿囊液、灭活，收取尿囊素液鸡胚废弃物需要高压处理，产生较多的生产废物，给环境保护带来压力。MDCK全悬浮细胞生产禽流感疫苗需要驯化种毒适应细胞的过程，需要周期长，而且有时达不到预期的毒价，其培养成本和生产工艺较为复杂。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种禽流感病毒血凝素抗原，该抗原兼具具广谱性和良好的免疫原性，免疫禽类后可产生较高滴度的抗体并且预防多种亚型的禽流感。

本发明的第二目的在于提供一种上述禽流感病毒血凝素抗原的制备方法。

本发明的第三目的在于提供一种上述禽流感病毒血凝素抗原或上述禽流感病毒血凝素抗原的制备方法制备得到的禽流感病毒血凝素抗原的应用。

本发明的第四目的在于提供一种禽流感疫苗，所述疫苗包含上述禽流感病毒血凝素抗原。

为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

一种禽流感病毒血凝素抗原，所述禽流感病毒血凝素抗原为具有如SEQ ID NO.1所示序列表达的血凝素蛋白；所述血凝素蛋白为哺乳动物表达系统表达的蛋白。

优选地，所述哺乳动物表达系统中，以HEK 293-F细胞作为宿主细胞。

本发明还提供了一种上述禽流感病毒血凝素抗原的制备方法，包括：在哺乳动物表达系统中，表达所述禽流感病毒血凝素抗原的基因。

优选地，在HEK 293-F细胞表达系统中表达所述禽流感病毒血凝素抗原的基因。