[发明专利]脂肪组织来源复合细胞群及其制备方法与应用

权利要求书

1.脂肪组织来源复合细胞群的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)洗涤脂肪组织：将获得的脂肪混合物首次离心，取上层脂肪组织，加入生理盐水，再次离心，直至生理盐水澄清，即得洗涤后的脂肪组织；

(2)分离脂肪组织：将所述步骤(1)洗涤后的脂肪组织加入螺旋式锁口注射器Ⅰ，用刀片式纳米脂肪移植乳化器将加入脂肪组织的螺旋式锁口注射器Ⅰ与另一个螺旋式锁口注射器Ⅱ连接，将所述脂肪组织经所述刀片式纳米脂肪移植乳化器推注至螺旋式锁口注射器Ⅱ中；

(3)所述洗涤后的脂肪组织依次经过1.5mm～2.0mm、0.8mm～1.0mm和0.5mm～0.7mm三种不同孔径的刀片式纳米脂肪移植乳化器，每孔径经过10次以上处理；

(4)将经过刀片式纳米脂肪移植乳化器处理后的脂肪组织收集于离心管中，加入生理盐水，离心分离；离心后的脂肪分为四层，自上向下依次为油滴层、成熟脂肪细胞层、生理盐水层和复合细胞群层；

(5)将所述油滴层、成熟脂肪细胞层和生理盐水层去除，收集底部的复合细胞群层；

(6)将所述步骤(5)收集的复合细胞群层，用生理盐水重悬，离心洗涤，弃上清；

(7)加入生理盐水，用细胞筛过滤除去复合细胞群层中的细胞碎片和基质成份部分，离心，弃上清，即得所述脂肪组织来源复合细胞群。

2.根据权利要求1所述的脂肪组织来源复合细胞群的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述洗涤后的脂肪组织依次经过2.0mm、1.0mm和0.5mm三种不同孔径的刀片式纳米脂肪移植乳化器。

3.根据权利要求1所述的脂肪组织来源复合细胞群的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中所述刀片式纳米脂肪移植乳化器的推注速度为10ml/3秒～25ml/3秒；

所述步骤(1)洗涤后的脂肪组织加入螺旋式锁口注射器Ⅰ的方法为：拨出所述螺旋式锁口注射器Ⅰ的活塞部分，将适量脂肪组织加入螺旋式锁口注射器Ⅰ中，排除多余空气。

4.根据权利要求1所述的脂肪组织来源复合细胞群的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中所述脂肪混合物为临床抽脂获得的脂肪混合物；所述首次离心的速度为700rpm/min～1200rpm/min，离心时间为1min～5min；所述再次离心的速度为800rpm/min～1500rpm/min，离心时间为1min～5min。

5.根据权利要求1所述的脂肪组织来源复合细胞群的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中加入生理盐水的量为：与收集于离心管中的所述经过刀片式纳米脂肪移植乳化器处理后的脂肪组织体积相等；所述离心分离的速度为1200rpm/min～2200rpm/min，离心分离时间为5min～10min。

6.根据权利要求1所述的脂肪组织来源复合细胞群的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中将所述油滴层、成熟脂肪细胞层和生理盐水层去除的方法为：用刻度移液管沿离心管管壁依次将所述油滴层、成熟脂肪细胞层和生理盐水层去除。

7.根据权利要求1所述的脂肪组织来源复合细胞群的制备方法，其特征在于：所述步骤(6)中所述离心洗涤的速度为1000rpm/min～2000rpm/min，离心洗涤时间为1min～5min。

所述步骤(7)中所述细胞筛为100μm～200μm的细胞筛；所述离心的速度为1000rpm/min～1800rpm/min，离心时间为1min～5min。

8.根据权利要求1-7中任一所述的脂肪组织来源复合细胞群的制备方法，其特征在于：所述脂肪组织来源复合细胞群为：去除脂肪组织中的脂肪细胞，保留脂肪组织中的体积微小的基质细胞、间充质干细胞、内皮前体细胞、巨噬细胞、血小板和血管内皮细胞的产物。

9.权利要求1-8中任一所述的脂肪组织来源复合细胞群的制备方法制备得到的脂肪组织来源复合细胞群。

10.权利要求9所述的脂肪组织来源复合细胞群在制备治疗骨关节炎、关节相关的炎症性疾病、炎症性关节炎疾病、软组织损伤或撕裂、软骨障碍、骨病的药物中的应用。