[发明专利]用于华法林用药相关基因分型检测的试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种用于华法林用药相关基因分型检测的试剂盒，其特征在于，包括独立包装的核酸扩增试剂、基于华法林用药相关基因设计的引物和荧光探针；所述核酸扩增试剂中包括纳米二氧化硅。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述纳米二氧化硅的粒径为50～500nm。优选的，所述纳米二氧化硅为球状。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸扩增试剂中还包括DNA聚合酶、dNTPs、扩增缓冲液和非离子型表面活性剂中的至少一种。

4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸扩增试剂，包括如下浓度的成分：

Taq酶，100～500mg/L；

dNTPs，50～200g/L；

Tris-HCl，0.5～2mL/L；

MgCl₂，10～40g/L；

KCl，5～20g/L；

(NH₄)₂SO₄，5～40g/L；

纳米二氧化硅，20～100g/L；

Triton X-100，1～5mL/L；

优选的，所述核酸扩增试剂，包括如下浓度的成分：

Taq酶，300mg/L；

dNTPs，100g/L；

Tris-HCl，1mL/L；

MgCl₂，20g/L；

KCl，10g/L；

(NH₄)₂SO₄，10g/L；

纳米二氧化硅，50g/L；

Triton X-100，2mL/L。

5.根据权利要求1-4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述引物或荧光探针的浓度为100～300mg/L。优选的，所述引物或荧光探针的浓度为200mg/L。

6.根据权利要求1-5任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述引物或荧光探针是基于VKORC1基因的rs9923231位点和CYP2C9基因的rs1057910位点中的至少一种设计的；优选的，基于VKORC1基因的rs9923231位点设计的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1-2所示，荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3-4所示；

基于CYP2C9基因的rs1057910位点设计的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：5-6所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：7-8所示。

7.根据权利要求1-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，还包括核酸提取试剂，所述核酸提取试剂包括红细胞裂解液，所述细胞裂解液包括溶液A和溶液B，所述溶液A为甲酸浓度为1～5mL/L的水溶液，溶液B为含碳酸钠4～8g/L、氯化钠10～20g/L和硫酸钠25～40g/L的水溶液；优选的，所述溶液A为甲酸浓度为1.2mL/L的水溶液，溶液B为含碳酸钠6g/L、氯化钠14.5g/L、硫酸钠31.3g/L的水溶液；优选的，还包括核酸提取试剂，所述核酸提取试剂包括核酸释放液，所述核酸释放液包括蛋白酶K浓度为10～40g/L、RNase浓度为A5～20g/L、EDTA浓度为5～20g/L的水溶液；优选的，所述核酸释放液包括蛋白酶K浓度为20g/L、RNase A浓度为10g/L、EDTA浓度为15g/L的水溶液。

8.根据权利要求1-7任一项所述的试剂盒用于华法林个体化用药相关基因分型的检测。