[发明专利]一种提取蜜环菌总DNA的试剂及其应用在审
| 申请号： | 201811099996.0 | 申请日： | 2018-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN108998448A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 王泽辉;张煜隆;刘艳玲;李晶;王安南;林兴生;罗海凌;林占熺 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 总DNA 蜜环菌 应用 分子生物学实验 分子生物学试验 提取总DNA 单个样品 分子标记 时间缩短 食药用菌 漂洗 金针菇 菌丝体 子实体 灵芝 裂解 洗脱 破碎 香菇 新鲜 | ||
1.一种提取蜜环菌总DNA试剂，其特征在于，其试剂包括平衡液、裂解液、洗涤液、洗脱液，其中：
（1）平衡液包含以下成分：3% Na2SiO3·9H2O，2% KOH；
（2）裂解液包含以下成分：5.0M盐酸胍，30%异丙醇和1.5%PVP K30；
（3）洗涤液包含以下成分：20 mM NaCl，20 mM Tris-HCl，85%乙醇，pH 7.5；
（4）洗脱液包含以下成分：10 mM Tris-HCl，pH 8.5。
2.基于权利要求1所述试剂提取蜜环菌总DNA方法，其特征在于，包含以下步骤：
（1）向DNA吸附柱中加平衡液200 μL，10,000 rpm离心1 min，弃废液，对DNA吸附柱进行预处理；
（2）将50 mg左右样品研磨后加入裂解液 500 µl，混匀，室温 10,000 rpm，离心30 s；
（3）将上清转移到处理过的DNA吸附柱，室温10,000 rpm离心1 min，弃废液；
（4）向DNA吸附柱中加入洗涤液 650 µl，室温10,000 rpm离心1 min，弃废液后将DNA吸附柱套回废液收集管，室温10,000 rpm离心1 min；
（5）将DNA吸附柱移到新的1.5 mL EP管中，开盖放置1-2 min去除乙醇残留，加入65℃预热的洗脱液，30-100µl，静置1-2 min；去除RNA时，在洗脱液中加入20 μg/ mL 的RNA酶，37℃孵育30 min；
（6）12,000 rpm离心2 min，洗脱DNA，保存备用。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA吸附柱为硅酸铝陶瓷纤维膜DNA吸附柱。
4.如权利要求1所述的试剂在提取蜜环菌总DNA中的应用。
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