[发明专利]一种提取长根菇基因组DNA的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种提取长根菇基因组DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的组成包括：

（1）平衡液，包含以下组成成分：1% Na₂SiO₃·9H₂O，1% NaOH；

（2）裂解液，包含以下组成成分：5.0M盐酸胍，25%异丙醇和1%PVP K30；

（3）洗涤液，包含以下组成成分：20 mM NaCl，20 mM Tris-HCl，85%乙醇，pH 7.5；

（4）洗脱液，包含以下组成成分：10 mM Tris-HCl，pH 8.5；

（5）DNA吸附柱。

2.根据权利要求1所述的一种提取长根菇基因组DNA的试剂盒，其特征在于，所述DNA吸附柱为硅酸铝陶瓷纤维膜DNA吸附柱。

3.一种利用权利要求1或2所述试剂盒提取长根菇基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）向DNA吸附柱中加平衡液200 μL，室温10,000 rpm离心1 min，弃废液，对DNA吸附柱进行预处理；

（2）将2-50 mg样品研磨后加入裂解液600 µl，混匀，室温 10,000 rpm，离心30 s；

（3）将上清转移到处理过的DNA吸附柱，室温10,000 rpm离心1 min，弃废液；

（4）向DNA吸附柱中加入洗涤液600 µl，室温10,000 rpm离心1 min，弃废液后将DNA吸附柱套回废液收集管，室温10,000 rpm，离心1 min；

（5）将DNA吸附柱移到新的1.5 mL EP管中，开盖放置1-2 min去除乙醇残留，加入65℃预热的洗脱液30-100µl，静置1-2 min；或在其中加入20 μg/ mL 的RNA酶，37℃孵育30min，去除RNA；

（6）室温12,000 rpm离心2 min，洗脱DNA，保存备用。

4.根据权利要求3所述的一种提取长根菇基因组DNA的方法，其特征在于，步骤（5）中的洗脱液，65℃预热。

5.如权利要求1 所述的一种提取长根菇基因组DNA的试剂盒在食用菌基因组DNA提取及ITS分子生物学鉴定中的应用。