[发明专利]一种仲丁灵半抗原与抗原的制备方法及应用

权利要求书

1.一种仲丁灵半抗原的制备方法，其特征在于：是由4-氯-3,5-二硝基苯乙酸与丁胺反应得到，其分子结构式为：

。

2.如权利要求1所述的仲丁灵半抗原的制备方法，其特征在于：该制备方法的具体步骤如下：

取4-氯-3,5-二硝基苯乙酸1.0 g，加50 mL乙醇溶解，加碳酸钠0.45 g，搅拌，加丁胺0.31 g，80℃油浴加热，搅拌3 h，检测，原料基本反应完全；停止反应，冷却到室温，旋蒸，除去乙醇，加80 mL水，用1 mol/L盐酸调节pH值到4，有大量浑浊，加80 mL乙酸乙酯萃取，水洗，上硅胶柱，用体积比为5:1的二氯甲烷/甲醇洗脱分离，得到仲丁灵半抗原产物1.05 g。

3.如权利要求1所述方法制备的仲丁灵半抗原的应用，其特征在于：所述仲丁灵半抗原用于制作动物免疫的抗原体系原料。

4.一种仲丁灵抗原的制备方法，其特征在于：所述仲丁灵抗原为仲丁灵半抗原与载体蛋白的偶联物，是由权利要求1所述仲丁灵半抗原与载体蛋白偶联得到；所述载体蛋白为甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白。

5.如权利要求4所述的仲丁灵抗原的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：取仲丁灵半抗原11 mg，加二甲基亚砜0.2 mL溶解，加三乙胺20 μL，搅拌，混匀，加氯甲酸异丁酯6mg，搅拌2 h，得到半抗原活化液A液；取50 mg牛血清白蛋白加0.1 mol/L pH值为7.2的磷酸盐缓冲液溶解，得到B液，将A液缓慢滴加到B液中，继续搅拌5 h，停止反应，0.02 mol/L PBS透析3天，每天换液3次，得到仲丁灵-BSA偶联物即仲丁灵抗原，分装，-20℃保存。

6.如权利要求4所述的仲丁灵抗原的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：取仲丁灵半抗原6 mg，加N,N-二甲基甲酰胺0.2 mL溶解，加碳二亚胺4.5 mg，搅拌，澄清，加N-琥珀酰亚胺2.24 mg，室温搅拌活化2 h，得到A液；取卵清蛋白50 mg，加6 mL 0.05 mol/L pH值为7.2的PB溶解，得到B液，将A液缓慢滴加到B液中，室温搅拌反应5 h，停止反应，0.02 mol/LPBS透析3天，每天换液3次，得到仲丁灵-OVA偶联物即仲丁灵抗原，分装，-20℃保存。

7.如权利要求4所述方法制备的仲丁灵抗原的应用，其特征在于：采用仲丁灵抗原免疫动物得到的单克隆抗体，用于建立酶联免疫吸附测定方法和胶体金试纸快速测定法，从而实现烟草及食品中仲丁灵的快速检测。