[发明专利]一种仲丁灵半抗原与抗原的制备方法及应用

说明书

一种仲丁灵半抗原与抗原的制备方法及应用，其特征在于：所述仲丁灵半抗原是由4‑氯‑3,5‑二硝基苯乙酸与丁胺反应得到；所述仲丁灵抗原是由仲丁灵半抗原与载体蛋白偶联得到。本发明制备的抗原呈现出特异性的仲丁灵抗原决定簇，使得筛选出高特异性的仲丁灵单克隆抗体成为可能。产生的抗体特异性高、灵敏度高，可用于建立酶联免疫吸附测定方法和胶体金试纸快速测定法，从而实现烟草及食品中仲丁灵的快速检测。

技术领域

本发明涉及一种仲丁灵半抗原与抗原的制备方法及应用。属于农药免疫化学技术领域。

背景技术

仲丁灵（Butralin）又名地乐胺、双丁乐灵、硝苯胺灵、比达宁、止芽素，化学名称为N-仲丁基-4-特丁基-2,6-二硝基苯胺，分子式为C₁₄H₂₁N₃O₄。仲丁灵为二硝基苯胺类除草剂，纯品为橙黄色结晶体，易溶于有机溶剂，而难溶于水，有挥发性，受光后易分解，对人畜等动物类毒性较低。该药为选择性萌前除草剂，其作用与氟乐灵相似。药剂进入植物体后，主要抑制分生组织的细胞分裂，从而抑制杂草的幼芽及幼根生长，导致杂草死亡。仲丁灵可应用于大田作物抑制杂草生长，也可用于水产养殖清除水体中的杂藻，仲丁灵在烟草生产中应用较多，主要用来抑制烟草叶芽生长。国际烟草科学研究合作中心（CORESTA）规定烟草中仲丁灵的指导性残留限量为5 mg/kg。

目前，有关仲丁灵残留检测的研究多集中在气相色谱法、液相色谱法、气相色谱串联质谱法、液相色谱串联质谱等色谱质谱方法。但是由于这些分析方法需要昂贵的大型仪器设备和专业的检测人员、前处理过程复杂、操作繁琐、检测成本高、分析速度慢，难以满足现场监测和大量样本中农药残留量快速筛查的需要。基于抗原抗体特异性识别的免疫分析方法可以定性定量检测样品中的农药残留。这种分析方法对仪器设备要求不高、快速简便，一般无需对样品进行复杂的预处理，灵敏度高、特异性强，对使用人员的专业技术要求不高，容易普及和推广，可满足快速分析检测的需要，尤其适宜现场筛选和大量样品的快速分析。免疫分析为仲丁灵残留研究提供了一个新的分析检测途径。免疫分析目前已成为农药残留分析研究的一个崭新领域，美国化学会将免疫分析与气相色谱、液相色谱共同列为农药残留分析的三大支柱技术。我国农药免疫分析技术研究起步相对较晚，但近年来发展迅速，有关于对硫磷、甲基对硫磷、甲基对氧磷、多菌灵、毒死蜱、三唑磷、氟虫腈、二氯喹啉酸、克百威、三唑酮、甲胺磷、阿特拉津、2甲4氯等农药的人工抗原和高亲和力的特异性抗体的制备及用ELISA法进行样品中痕量农药分析的报道。

本发明属于农药小分子化合物免疫化学和残留分析技术领域，涉及有机合成、免疫化学及生物化学等，依靠免疫学、免疫化学基本原理和生物技术手段，设计、合成小分子目标分析物半抗原，并与载体蛋白质偶联，制备有效人工抗原。制备的抗原可以通过免疫动物制备对小分子分析物特异性识别的抗体，利用抗原抗体的特异性免疫学反应和易被检测识别的标记物的放大作用，定量的检测样品中超微量小分子目标物。半抗原的分子设计与合成是产生特异性抗体和建立农药残留免疫分析方法的关键步骤。人工抗原的制备，包括结合位点、结合方式、载体种类及半抗原与目标分析物质任何结构上的差异，诸如分子大小、形状、成分、构型、构象、极性、电子云密度等在内的拓扑性征，都可能极大的影响着相应抗体的性质。目前关于仲丁灵半抗原及抗原的制备方法尚未见报道。

发明内容

本发明的目的正是基于上述现有技术状况而提供一种仲丁灵半抗原与抗原的制备方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种仲丁灵半抗原的制备方法，是由4-氯-3,5-二硝基苯乙酸与丁胺反应得到，其分子结构式为：

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具体步骤如下：