[发明专利]一种HRP印迹水凝胶的制备方法

权利要求书

1.一种HRP印迹水凝胶的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

（1）A液制备：将丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺充分溶解于超纯水中，密封冷藏保存，制得A液；

（2）辣根过氧化物酶HRP印迹水凝胶溶液制备：将模板辣根过氧化物酶HRP 蛋白溶解于A液中并搅拌均匀，再依次添加超纯水、10wt%过硫酸铵和四甲基乙二胺混合均匀，得到辣根过氧化物酶HRP印迹水凝胶溶液；

（3）辣根过氧化物酶HRP印迹聚丙烯酰胺水凝胶的制备：将步骤（2）所得的HRP印迹水凝胶溶液聚合成凝胶后，先用洗脱液洗脱其模板辣根过氧化物酶HRP蛋白分子，再经水洗，制得辣根过氧化物酶HRP印迹水凝胶；

步骤（1）所得的A液中丙烯酰胺的质量浓度为10～40%，丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的质量比为15：（0.2～0.8）；步骤（2）中辣根过氧化物酶HRP蛋白的用量为2.0～10 mg，A液的体积为：2.0～10 mL，添加超纯水的体积为：4.0～8.0 mL，10wt%过硫酸铵的体积为：20～200 μL，四甲基乙二胺的体积为4μL；步骤（3）所用的洗脱液为 10 wt% SDS、1mol/L NaCl、10 V% 乙酸、10 wt%SDS与10 V%乙酸等体积比混合液中的一种。

2.根据权利要求1所述的一种HRP印迹水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤（3）中凝胶聚合时间为10～60 min。

3.一种由权利要求1-2任意一项所述方法制备的HRP印迹水凝胶。

4.一种如权利要求3所述的HRP印迹水凝胶在可视化检测HRP中的应用，其特征在于：将制得的辣根过氧化物酶HRP印迹水凝胶切割成胶条，固定于白色底板上，室温晾干，含辣根过氧化物酶HRP样品溶液滴加到胶条上，静置，充分吸附，并用超纯水洗去未键合分子，室温晾干，滴加3,3',5,5'-四甲基联苯胺TMB-H₂O₂溶液，观察颜色变化。

5.根据权利要求4所述的HRP印迹水凝胶在可视化检测HRP中的应用，其特征在于：样品溶液的体积为5～20 μL，静置吸附时间为10～60 min。

6.根据权利要求4所述的HRP印迹水凝胶在可视化检测HRP中的应用，其特征在于：所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺TMB-H₂O₂溶液中TMB的浓度为20～80 mmol/L，3,3',5,5'-四甲基联苯胺TMB与H₂O₂的摩尔比为：5:（4～10），3,3',5,5'-四甲基联苯胺TMB-H₂O₂混合溶液需新鲜配制，滴加体积为5～20 μL，显色时间为1～10 min。