[发明专利]一种HRP印迹水凝胶的制备方法

说明书

本发明公开了一种HRP印迹水凝胶的制备方法，采用丙烯酰胺（AAm）为功能单体，甲叉双丙烯酰胺(MBAA)为交联剂，过硫酸铵（APS）为催化剂，四甲基乙二胺(TEMED)为引发剂，辣根过氧化物酶（HRP）为模板分子，按照一定配比原位聚合制成厚度为1mm的HRP印迹水凝胶，洗去模板分子，样品溶液直接滴加到凝胶表面，经吸附，洗去未键合分子，采用3,3',5,5'‑四甲基联苯胺(TMB)‑H₂O₂体系显色，所产生的颜色可直接肉眼检测。本发明的制备方法简单，成本低，制备的HRP印迹水凝胶检测方便，可多次重复使用，可高选择性地识别血清样品中HRP，有效地去除基质干扰，具有很大的应用价值和市场前景。

技术领域

本发明属于分析化学和蛋白质识别传感器技术领域,，具体涉及一种HRP印迹水凝胶的制备方法。

背景技术

分子印迹技术，是模拟自然界所存在的分子识别作用，制备包裹模板分子的聚合物网状结构的人工受体，它是涉及高分子化学、生物化学、材料化学、分析化学等学科的一种用于分离纯化的先进技术。所制备的聚合物称为分子印迹聚合物（molecular imprintedpolymer, MIP）。分子印迹聚合物是一种具有较强分子识别能力的新型高分子仿生材料。基于分子印迹聚合物具有与天然抗体相似的识别选择性和高分子材料的抗腐蚀性能的双重优点，因而正逐步应用于分析化学、生物工程、临床医学、环境监测、食品工业等众多领域，有希望在将来逐步替代不稳定的传统生物传感器。

分子印迹材料是一种空穴大小、形状，和功能基团与模板分子相匹配的聚合物，对模板分子具有特异性识别能力，可用于目标分子的分离、富集、定性和定量分析，它的先进之处就在于它的预定性、特异识别性、广泛实用性。蛋白质印迹材料具有对溶液pH和环境温度等耐受性强，成本低、稳定性高等优点，在样品的预处理、分离富集、生物传感器等方面取得了一定成绩，但与小分子相比，蛋白质印迹技术仍处于摸索阶段，尤其在模板分子的种类、水相体系中的制备、选择性等方面仍然面临许多困难与挑战。

基于“分子印迹聚合物（MIP）”取代生物分子作为人工抗体的仿生传感器，在21 世纪逐渐成为传感器领域的研究热点。分子印迹技术常用的分析方法通常包括：紫外可见光谱，电化学，表面等离子共振，色谱，荧光等。然而这些方法需要特殊的仪器设备或繁琐的操作步骤，因此需要建立更直接、高效、简单的检测方法以提高分子印迹技术的应用价值。

在众多分析方法中,由于可视化方法具有低成本、快速、简单、可裸眼检测等优点而被很多研究者广泛关注。但在分子印迹技术中研究报道不多，这可能是因为分析方法需要与印迹材料相一致，才得以实现信号转换，因此在印迹材料的设计上需要考虑印迹材料本身的颜色，以及不破坏印迹材料的显色方法，据此本发明设计一种HRP印迹比色水凝胶的制备方法，采用一步原位聚合法制备HRP印迹丙烯酰胺水凝胶，采用直接显色法检测目标物，可用于目标物的直接分析，该凝胶制备方法简单，成本低廉，可重复使用，其比色法，不需特殊设备，直接出分析结果，可用于目标物的便携式检测，实现定性和半定量分析。

发明内容

本发明的目的是提供一种HRP印迹水凝胶的制备方法，用于目标蛋白的识别与检测。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种HRP印迹水凝胶的制备方法，包括以下步骤：

（1）A液制备：将丙烯酰胺（AAm）和甲叉双丙烯酰胺（MBAA）充分溶解于超纯水中，定容至50 mL，密封冷藏保存，制得A液。

（2）HRP印迹水凝胶溶液制备：将HRP 蛋白溶解于A液中并搅拌均匀，再依次添加超纯水、10wt%过硫酸铵（APS）和4 μL四甲基乙二胺（TEMED）混合均匀，得到HRP印迹水凝胶溶液。