[发明专利]一种含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法

权利要求书

1.一种含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法，其特征在于，包括：

(1)将可光固化生物水凝胶用含有光引发剂的PBS溶液溶解，制得低浓度和高浓度两种生物墨水；所述的可光固化生物水凝胶为甲基丙烯酸明胶，低浓度生物墨水中的甲基丙烯酸明胶浓度为5-15％(w/v)，高浓度生物墨水中的甲基丙烯酸明胶浓度为20-30％(w/v)；

(2)收集培养皿内细胞汇合度80％以上的间充质干细胞，进行消化、离心处理后，使用步骤(1)制得的低浓度生物墨水重悬间充质干细胞，得到载细胞生物墨水；

(3)将载细胞生物墨水和步骤(1)制得的高浓度的生物墨水分别装入生物3D打印装置的两个喷头中，使生物墨水都成凝胶状；

(4)设置生物3D打印装置的打印参数，按照预先设定的指令，首先在匀速旋转的光轴上打印载细胞生物墨水，得到第一层神经导管；然后在第一层神经导管表面打印高浓度生物墨水，得到初始双层中空管状神经导管；

(5)将得到的初始双层中空管状神经导管进行紫外光照射，得生物型多层神经导管。

2.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的光引发剂为2-羟基-4-(2-羟基乙氧基)-2-甲基丙二酮或苯基-1,4-6-三甲基苯甲酰膦酸锂中的一种，光引发剂在PBS溶液中的浓度为0.05-0.1％(w/v)。

3.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的间充质干细胞为骨髓间充质干细胞。

4.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的载细胞生物墨水中的间充质干细胞密度为1.0×10⁶-1.0×10⁷ml^-1。

5.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述生物3D打印装置的两个喷头的温度分别低于载细胞生物墨水和高浓度的生物墨水胶凝点温度1-3℃。

6.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法，其特征在于，步骤(4)中，打印过程中，喷头沿光轴的轴线方向往返运动，光轴的转速为15-25rpm，喷头移动速度为100-300mm/min。

7.根据权利要求6所述的含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法，其特征在于，所述光轴的外径为1-5mm，所述喷头的针头内径为159-603μm。

8.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述的紫外光波长365nm，紫外光照射密度为2W/cm²，光照时间30-60s。