[发明专利]一种含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法

说明书

本发明公开了一种含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法，包括：(1)将可光固化生物水凝胶用含有光引发剂的PBS溶液溶解，制得两种浓度生物墨水；(2)收集细胞汇合度80％以上的间充质干细胞，处理后使用低浓度生物墨水重悬间充质干细胞，得到载细胞生物墨水；(3)将载细胞生物墨水和高浓度的生物墨水分别装入生物3D打印装置的两个喷头中；(4)设置打印参数，首先在匀速旋转的光轴上打印载细胞生物墨水，得到第一层神经导管；然后打印高浓度生物墨水，得到双层中空管状神经导管；(5)进行紫外光照射，得生物型多层神经导管。利用本发明，制备耗时短、简单，操作条件温和，制备的神经导管结构简单，生物相容性好，可降解。

技术领域

本发明属于神经导管的设计与制备领域，尤其是涉及一种含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法。

背景技术

神经系统(nervous system)是机体内对生理功能活动的调节起主导作用的系统，主要由神经组织组成，分为中枢神经系统和周围神经系统两大部分。各种外伤如压迫、牵伸、撕裂等和肿瘤、局部缺血等其他因素易造成神经系统损伤，从而导致神经系统功能缺失和其他神经性疾病，严重降低患者的工作和生活的质量。目前主流的神经修复技术有如下几种：直接吻合、自体同源或异体同源神经移植以及借助神经导管修复。直接吻合只可以用于神经断伤较短(8mm)的情况，且其疗效优良率不高；而自体同源或异体同源神经移植会导致供区神经功能丧失，存在二次手术等问题，而神经导管修复术(桥接术)却可以弥补前两项技术的不足之处，吸引着越来越多研究者和医生的目光。

公开号为CN108379667A的中国专利文献公开了一种新型生物降解神经导管及其制备技术，提出了由聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物、聚碳酸亚乙酯、聚乳酸和聚乙醇酸中的一种或几种制得管状神经导管的方法，首先将所选材料溶于极性溶剂制得溶解液，然后将溶解液涂布或平铺于模具上，得到带有溶解液的模具，接着将所述带有溶解液的模具置于水中，即得管状支架。该制备方法采用的生物材料可降解，不会引起对神经生长的嵌压，且制备方法简单易操作。但是该方法采用的溶液置换法制备神经导管十分耗时，仅加热和干燥过程就分别需要1.5-2h和36-48h，不能满足急迫的神经导管需求；而且采用的制造工艺只能制备简单结构的神经导管，不能对神经导管的微观结构进行设计，比如神经导管的孔隙大小、孔隙分别以及孔隙率。

随着组织工程的不断发展，研究者们发现神经生长因子或种子细胞有利于加快周围神经的形貌和功能性恢复，遂此制备含神经生长因子或者种子细胞的神经导管逐渐兴起。公开号为CN105597148A的中国专利文献公开了一种用于神经损伤修复的神经支架的方法。该神经支架包括胶原支架、培养在胶原支架上的神经干细胞、以及由肝素固定在胶原支架上的生长因子。该方法的具体制备工艺如下：首先配制胶原溶液；然后将溶液倒入磨具，通过冻干灭菌得到胶原海绵；接着将胶原海绵依次浸泡于含肝素的交联溶液和生长因子溶液；最后神经干细胞原代培养于上述神经支架上，得到载细胞和生长因子的神经导管。该制备方法取材方便，步骤简单，避免了酸碱中和、透析等复杂步骤，减少了胶原材料接触有害试剂的机会，所获得的神经支架安全性提高。但是神经导管上生长因子和神经干细胞的贴附位置、分布密度等随机的，不可控，无法获得神经干细胞和神经生长因子均匀分布、梯度分布的或者程序性分布的神经导管。

发明内容

本发明的目的在于提供一种含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法，制备耗时短、简单，操作条件温和，制备的神经导管结构简单，生物相容性好，可降解，不会引起对神经生长的嵌压。

一种含有间充质干细胞的生物型多层神经导管制备方法，包括：

(1)将可光固化水凝胶用含有光引发剂的PBS溶液溶解，制得低浓度和高浓度两种生物墨水；

(2)收集培养皿内细胞汇合度80％以上的间充质干细胞，进行消化、离心处理后，使用步骤(1)制得的低浓度生物墨水重悬间充质干细胞，得到载细胞生物墨水；