[发明专利]一种溶血血清样品中血红蛋白的去除方法在审
| 申请号： | 201811108617.X | 申请日： | 2018-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN109406248A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 曾凡明;胡治勇;冉凯凯 | 申请（专利权）人： | 武汉戴安生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N1/34 | 分类号： | G01N1/34;G01N1/40 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 杨立;李航 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 血红蛋白 血清样品 溶血 去除 免疫吸附 层析柱 血红蛋白抗体 层析介质 特异性强 血清检测 流穿液 血清 偶联 | ||
1.一种溶血血清样品中血红蛋白的去除方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1:将血红蛋白抗体偶联至亲和层析介质得到免疫吸附试剂；
S2:将所述免疫吸附试剂加入层析柱中，然后将溶血血清样品过层析柱，流穿液即为纯化后的不含血红蛋白的血清样品。
2.根据权利要求1所述的一种溶血血清样品中血红蛋白的去除方法，其特征在于，所述亲和层析介质为溴化氰活化的琼脂糖凝胶微球，所述步骤S1的具体步骤为：称取溴化氰活化的琼脂糖凝胶冻干粉装入层析柱中，用1mM的HCl于4℃活化15～30min，然后洗涤3～5次，抽干残留的HCl，得到溴化氰活化的琼脂糖凝胶微球，用偶联缓冲液平衡，将血红蛋白抗体用偶联缓冲液稀释至1mg/mL，然后加入装有溴化氰活化的琼脂糖凝胶微球的层析柱中，室温孵育3～4h，加入的血红蛋白抗体与所述溴化氰活化的琼脂糖凝胶冻干粉的质量比为17～30:1，孵育结束后用偶联缓冲液洗涤3～5次，然后加入封闭液封闭层析柱，室温放置4～8h，流出封闭液，将层析柱用偶联缓冲液洗涤3次，分别用酸洗液和碱洗液交替洗涤，各洗涤3次，得到的偶联有血红蛋白的亲和层析介质即为免疫吸附试剂，将所述免疫吸附试剂加入柱子保存液中，-20℃保存。
3.根据权利要求2所述的一种溶血血清样品中血红蛋白的去除方法，其特征在于，所述偶联缓冲液包括0.1M NaHCO3,0.5M NaCl，pH为8.3。
4.根据权利要求2所述的一种溶血血清样品中血红蛋白的去除方法，其特征在于，所述封闭液为pH为8.0的1M Tris-base。
5.根据权利要求2所述的一种溶血血清样品中血红蛋白的去除方法，其特征在于，所述酸洗液包括0.1M HCl、0.5M NaCl，pH为4.0，所述碱洗液包括0.1M Tris-HCl、0.5M NaCl，pH为8.0。
6.根据权利要求1所述的一种溶血血清样品中血红蛋白的去除方法，其特征在于，所述步骤S2的具体步骤为将偶联有血红蛋白的免疫吸附试剂装入层析柱中，用1X PBS洗涤3～5遍，加入溶血血清样品，室温孵育10～15min，静置5min，收集流穿液，即为纯化后的不含血红蛋白的血清样品。
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