[发明专利]一种溶血血清样品中血红蛋白的去除方法

说明书

本发明涉及一种溶血血清样品中血红蛋白的去除方法，包括以下步骤：S1.将血红蛋白抗体偶联至亲和层析介质得到免疫吸附试剂；S2.将免疫吸附试剂加入层析柱，然后将溶血血清样品过层析柱，流穿液即为纯化后的不含血红蛋白的血清样品。本发明的方法操作简单便捷，并且血红蛋白的去除效率高，特异性强，对血清中的原有成分无影响，使血清检测不受干扰。

技术领域

本发明涉及生化检测技术领域，具体涉及一种溶血血清样品中血红蛋白的去除方法。

背景技术

临床制备待检测血清样品时，经常会发生不同程度的溶血反应，血红蛋白进入血清样品中，很难除去。血红蛋白在血液中含量极高，1mL全血中可达到150mg左右，样品中血红蛋白的残留量的范围比较广泛，但血红蛋白是一种常见的临床样品检测干扰物，产生干扰的原因主要有两点：1、血红蛋白的卟啉环具有明显的氧化反应活性，可催化临床检验中常用的过氧化物酶底物的显色反应，已有大量数据证明，血红蛋白具有过氧化物酶(HRP)的反应活性，可以催化HRP的底物发生颜色反应，从而对需要氧化酶的检测造成严重干扰，这些检测包括酶连吸附免疫检测(ELISA)及部分HRP参与的层析检测；2、血红蛋白的卟啉环本身具有自发荧光，且荧光反应比较强烈，对荧光定量层析反应存在明显干扰。

据申晓敏等的报告，在血红蛋白的干扰实验中，血红蛋白浓度≥1mg/mL时对AST、TBIL、DBIL、CK、LDH检测有干扰，血红蛋白浓度≥4mg/mL时对TP、CR、TRIG检测有干扰，血红蛋白浓度>2mg/mL时对uA检测有干扰，血红蛋白对临床检验的干扰十分常见和普遍。

目前，尚未有简易可行的特异性去除血红蛋白的方法报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种高效便捷的去除溶血血清样品中血红蛋白的方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种溶血血清样品中血红蛋白的去除方法，包括以下步骤：

S1.将血红蛋白抗体偶联至亲和层析介质得到免疫吸附试剂；

S2.将所述免疫吸附试剂加入层析柱中，然后将溶血血清样品过层析柱，流穿液即为纯化后的不含血红蛋白的血清样品。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，所述亲和层析介质为溴化氰活化的琼脂糖凝胶微球，所述步骤S1的具体步骤为：称取溴化氰活化的琼脂糖凝胶冻干粉装入层析柱中，用1mM的HCl于4℃活化15～30min，然后洗涤3～5次，抽干残留的HCl，得到溴化氰活化的琼脂糖凝胶微球，用偶联缓冲液平衡，将血红蛋白抗体用偶联缓冲液稀释至1mg/mL，然后加入装有溴化氰活化的琼脂糖凝胶微球的层析柱中，室温孵育3～4h，加入的血红蛋白抗体与所述溴化氰活化的琼脂糖凝胶冻干粉的质量比为17～30:1，孵育结束后用偶联缓冲液洗涤3～5次，然后加入封闭液封闭层析柱，室温放置4～8h，流出封闭液，将层析柱用偶联缓冲液洗涤3次，分别用酸洗液和碱洗液交替洗涤，各洗涤3次，得到的偶联有血红蛋白的亲和层析介质即为免疫吸附试剂，将所述免疫吸附试剂加入柱子保存液中，-20℃保存。

进一步，所述偶联缓冲液包括0.1M NaHCO₃,0.5M NaCl，pH为8.3。

进一步，所述封闭液为pH为8.0的1M Tris-base。

进一步，所述酸洗液包括0.1M HCl、0.5M NaCl，pH为4.0，所述碱洗液包括0.1MTris-HCl、0.5M NaCl，pH为8.0。

进一步，所述步骤S2的具体步骤为将偶联有血红蛋白的免疫吸附试剂装入层析柱中，用1 X PBS洗涤3～5遍，加入溶血血清样品，室温孵育10～15min，静置5min，收集流穿液，即为纯化后的不含血红蛋白的血清样品。