[发明专利]一种猫细小病毒抗体ELISA试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种猫细小病毒抗体ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括包被有抗原的酶标板和酶标抗体；所述抗原为FPV纯化抗原，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的山羊抗猫IgG抗体。

2.如权利要求1所述的猫细小病毒抗体ELISA试剂盒，其特征在于，所述FPV纯化抗原的工作浓度为5μg/mL。

3.如权利要求1所述的猫细小病毒抗体ELISA试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体的稀释倍数为1:6000。

4.如权利要求1所述的猫细小病毒抗体ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括封闭液和漂洗液，所述封闭液为包含5％脱脂乳的PBS缓冲液，所述漂洗液为包含0.05％吐温-20的PBS缓冲液。

5.一种猫细小病毒抗体ELISA检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：

1)制备FPV纯化抗原；

2)以制备的FPV纯化抗原为包被抗原，用碳酸盐缓冲液稀释为5μg/mL包被酶标板；

3)待测血清用PBS缓冲液按照1:50倍稀释用于检测；

4)漂洗三次后，加入1:6000倍稀释的辣根过氧化物酶标记的山羊抗猫IgG抗体；

5)TMB显示，终止液终止，测定反应各孔OD₄₅₀值，根据判定标准进行判断。

6.如权利要求5所述的猫细小病毒抗体ELISA检测方法，其特征在于，步骤2)包被的温度为4℃，包被时间为8h。

7.如权利要求5所述的猫细小病毒抗体ELISA检测方法，其特征在于，步骤1)具体方法为：培养F81细胞，待细胞生长至80％汇合，按照感染复数为1的比例接种FPV病毒，待培养72h后收集病毒液，反复冻融3次，于4℃，3000g离心20min，收集上清，将收集的上清使用超速离心机35000g于4℃离心2h，浓缩病毒，每管沉淀用200μL PBS重悬，充分混匀，用紫外分光光度法测定抗原蛋白含量，即得所述FPV纯化抗原。

8.如权利要求5所述的猫细小病毒抗体ELISA检测方法，其特征在于，步骤2)还包括对包被的酶标板进行封闭和漂洗的步骤，封闭过程具体为包含5％脱脂乳的PBS缓冲液在37℃下封闭1h，封闭过程结束后，加入包含0.05％吐温-20的PBS缓冲液洗涤三次。

9.如权利要求5所述的猫细小病毒抗体ELISA检测方法，其特征在于，所述判定标准的确定方法如下：选择30份猫FPV阴性血清样品，用建立的ELISA检测方法检测猫FPV阴性血清样品，获得各样品的OD₄₅₀值，计算OD₄₅₀的平均值和标准差(SD)，根据公式确定判定标准。