[发明专利]一种猫细小病毒抗体ELISA试剂盒及其检测方法

说明书

本发明提供一种猫细小病毒抗体ELISA试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括包被有抗原的酶标板和酶标抗体；所述抗原为FPV纯化抗原，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的山羊抗猫IgG抗体；本发明提供的猫细小病毒抗体ELISA试剂盒及其检测方法对猫细小病毒抗体的检测具有非常高的敏感性、特异性和准确性。

技术领域

本发明属于猫细小病毒抗体检测领域，特别涉及一种猫细小病毒抗体ELISA试剂盒。

背景技术

实验猫常被用于脑神经的生理及病理学实验，也是药理学实验和动物疾病模型中常用的动物，但是由于在饲料、饲养、繁殖和疫病净化等方面存在难题，猫的实验动物化进展缓慢。国外很多国家已经建立了实验猫的繁育基地，有的国家通过疫病净化已培育出SPF猫和无菌猫，而我国目前尚无权威的猫保种和繁育基地，多数用于实验的猫多来自于宠物猫或捕获的野猫，安全隐患突显。

猫细小病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)又称猫泛白细胞减少综合征病毒、猫传染性肠炎病毒或猫瘟病毒，主要感染猫科和鼬科等多种动物，是目前肉食动物细小病毒属中感染范围最广、致病性最强的一种病毒，能引起以高热、呕吐、肠炎和白细胞严重减少为特征的急性、高度接触性传染病，死亡率一般为50％～60％。该病在世界范围内存在，我国多地均有本病发生，对猫及其它猫科动物危害极大。针对该病免疫，有多种商品化疫苗(荷兰英特威、美国辉瑞和法国维克等)可以选择，但是针对该病的诊断试剂却参差不齐，因此，建立一种快速、准确、特异和灵敏的诊断方法不仅对于猫群体疫病净化有重要意义，更有利于推动我国实验猫的实验动物化进程。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种猫细小病毒抗体ELISA试剂盒及其检测方法。

本发明具体技术方案如下：

本发明提供一种猫细小病毒抗体ELISA试剂盒，该试剂盒包括包被有抗原的酶标板和酶标抗体；所述抗原为FPV纯化抗原，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的山羊抗猫IgG抗体。

进一步的改进，所述FPV纯化抗原的工作浓度为5μg/mL。

进一步的改进，所述酶标抗体的稀释倍数为1:6000。

进一步的改进，所述试剂盒还包括封闭液和漂洗液，所述封闭液为包含5％脱脂乳的PBS缓冲液，所述漂洗液为包含0.05％吐温-20的PBS缓冲液。

本发明另一方面提供一种猫细小病毒抗体ELISA检测方法，该检测方法包括：

1)制备FPV纯化抗原；

2)以制备的FPV纯化抗原为包被抗原，用碳酸盐缓冲液稀释为5μg/mL包被酶标板；

3)待测血清用PBS缓冲液按照1:50倍稀释用于检测；

4)漂洗三次后，加入1:6000倍稀释的辣根过氧化物酶标记的山羊抗猫IgG抗体；

5)TMB显示，终止液终止，测定反应各孔OD₄₅₀值，根据判定标准进行判断。

其中终止液为2M的硫酸溶液。

进一步的改进，步骤2)包被的温度为4℃，包被时间为8h。

进一步的改进，步骤1)具体方法为：培养F81细胞，待细胞生长至80％汇合，按照感染复数为1的比例接种FPV病毒，待培养72h后收集病毒液，反复冻融3次，于4℃，3000g离心20min，收集上清，将收集的上清使用超速离心机35000g于4℃离心2h，浓缩病毒，每管沉淀用200μL PBS重悬，充分混匀，用紫外分光光度法测定抗原蛋白含量，即得所述FPV纯化抗原。