[发明专利]一种朱顶红脱毒组织培养和快速繁殖方法

权利要求书

1.一种朱顶红脱毒组织培养方法，其特征在于，经高温脱毒、消毒后，取鳞茎片后培养至产生原球茎，再经多代培养以连续脱毒；

所述高温脱毒的方法包括：先逐渐升温到40±0.5℃下，再长时间保持在38±0.5℃；

以从所述原球茎剥离出来的小原球茎作为外植体进行第一代培养，以后的每一代以上一代培养出的小苗或小原球茎为外植体进行培养；

所述第一代培养的外植体为3～8mm的小原球茎；

所述第二代培养的外植体为1～3mm的小原球茎；

其中，所述取鳞茎片后培养和所述多代培养的每一代培养基中均包含5～60mg/L病毒唑。

2.根据权利要求1所述的脱毒组织培养方法，其特征在于，所述逐渐升温的方法包括：第一天的温度为30±0.5℃，以后每天升温2±0.5℃直至40±0.5℃；

优选地，所述高温脱毒的条件包括：时间为50～52天，空气湿度为75％～80％。

3.根据权利要求1所述的脱毒组织培养方法，其特征在于，所述多代培养为3～5代培养；

优选地，所述病毒唑在所述每一代培养基中的含量逐渐降低；

优选地，所述取鳞茎片后培养、所述第一代培养与所述第二代培养所用的培养基中包含10～60mg/L病毒唑；

优选地，所述第三代培养所用的培养基中包含5～10mg/L病毒唑。

4.根据权利要求1所述的脱毒组织培养方法，其特征在于，所述取鳞茎片后培养和所述多代培养的培养基中均分别包括：MS培养基、6-BA、NAA、KT、花宝一号；所述6-BA、NAA、KT、花宝一号的质量分数分别为1.5～2.0mg/L、0.1～0.5mg/L、0.1～0.2mg/L、0.8～1g/L；

优选地，所述取鳞茎片后培养和所述多代培养的培养基中还分别包括25～35g/L蔗糖；

优选地，所述取鳞茎片后培养和多代培养的培养基pH均为5.3～6.0。

5.根据权利要求1所述的脱毒组织培养方法，其特征在于，所述鳞茎片为带有生长点的长度为0.8～1.1cm的鳞茎片。

6.根据权利要求1所述的脱毒组织培养方法，其特征在于，所述鳞茎片消毒包括：在无菌环境下，依次用70％～75％酒精、质量分数为0.08～0.12％HgCl₂溶液进行消毒；

优选地，所述鳞茎片消毒包括：在无菌环境下，用75％酒精浸泡1～1.5min，然后用质量分数为0.05～0.15％HgCl₂浸泡8～15min，用水清洗7～10次。

7.根据权利要求1所述的脱毒组织培养方法，其特征在于，所述第一代培养的培养条件包括：在温度为25～26℃，光照强度为1500～2000Lx，光照时间为12～13h/d的条件下培养30～32天；

优选地，所述第二代培养和所述第三代培养的培养条件均包括：温度为25～26℃，光照强度为2000～3500Lx，光照时间为16～17h/d；

优选地，所述第二代培养的时间为30～32天；

优选地，所述第三代培养的时间为70～75天。

8.一种朱顶红的快速繁殖方法，其特征在于，按权利要求1～7任一项所述的脱毒组织培养方法得到组培苗，经病毒检测后，将无毒苗进行驯化移栽；

优选地，所述驯化移栽的方法包括：先使处于培养液中的叶长为8～10cm，鳞球茎为3～5mm，根为2～4条的苗在自然光下适应7～8天，再移栽到基质中。

9.根据权利要求8所述的快速繁殖方法，其特征在于，所述基质的组分包括泥炭石、珍珠岩、蛭石，所述泥炭石、珍珠岩、蛭石的重量比为3:(2.8～3.2):(1.8～2.2)；

优选地，所述基质经次氯酸钠消毒。

10.根据权利要求8所述的快速繁殖方法，其特征在于，所述移栽后还包括：所述移栽第一天喷施1500倍多菌灵，第1～3天的每天上午喷施1/2MS培养液；

所述移栽的条件包括：温度为22～26℃，湿度为70～85％，光照强度为4500～6000Lx。