[发明专利]一种抗体进化方法及其应用

权利要求书

1.一种抗体进化方法，所述抗体进化方法包含以下步骤：

1）提供单碱基基因编辑系统，所述单碱基基因编辑系统可形成单碱基基因编辑复合体，所述单碱基基因编辑复合体包括dCas9酶、sgRNA、MS2胞嘧啶脱氨酶融合蛋白，所述sgRNA 靶向待进化抗体的可变区基因；

2）利用1）中所述的单碱基基因编辑系统对待进化抗体的可变区基因进行碱基突变，表达突变抗体，获得突变抗体库；所述突变抗体经表面展示系统进行展示；所述表面展示系统包括抗体表面展示载体，所述抗体表面展示载体能用于表达突变抗体基因；将抗体的可变区基因与抗生素抗性基因相连，使得抗体的可变区基因的移码突变或终止密码子突变可影响抗生素抗性基因或营养缺陷互补基因的编码；

3）筛选并富集高亲和力抗体；

所述MS2胞嘧啶脱氨酶融合蛋白中，胞嘧啶脱氨酶选自AID-mono、AID-crystal、AID-act、人Apobec3a、人Apobec3b 、AID-A3c和AID-A3f中的多种；

所述步骤2）还包括：利用1）中所述的单碱基基因编辑系统对获得的突变抗体库进行多轮的碱基突变，获得突变抗体库。

2.如权利要求1所述的抗体进化方法，其特征在于，步骤2）中，所述突变抗体库进行下一轮碱基突变时，先进行筛选与富集。

3.如权利要求1所述的抗体进化方法，其特征在于，所述sgRNA包括靶向待进化抗体的可变区基因的靶向段，以及MS2发夹结构，所述MS2发夹结构用于招募MS2胞嘧啶脱氨酶融合蛋白。

4.如权利要求3所述的抗体进化方法，其特征在于，所述sgRNA包括2个MS2发夹结构。

5.如权利要求1所述的抗体进化方法，其特征在于，所述单碱基基因编辑系统包括DNA构建体，所述DNA构建体中，含有sgRNA编码基因、MS2胞嘧啶脱氨酶融合蛋白的编码基因，dCas9酶的编码基因中的一个或多个。

6.如权利要求5所述的抗体进化方法，其特征在于，所述单碱基基因编辑系统的DNA构建体中，sgRNA编码基因有一种或多种。

7.如权利要求1所述的抗体进化方法，其特征在于，步骤2）中所用的抗体表面展示载体上，在利用单碱基基因编辑系统进行基因突变之前，在抗体表面展示载体上的抗体的可变区基因与抗生素抗性基因中插入t2A肽段编码序列，将抗体的可变区基因与抗生素抗性基因通过t2A肽段编码序列相连。

8.如权利要求1所述的抗体进化方法，其特征在于，所述步骤3）中，筛选并富集高亲和力抗体的方法为利用流式细胞仪进行筛选。