[发明专利]GSDMD-N基因重组质粒及在乳腺表达的方法和应用在审
| 申请号： | 201811112277.8 | 申请日： | 2018-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN109136265A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 杨勇军;颜世卿;马超颖;潘志明;马轲;陈巍 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;A61K48/00;A61K38/17;A61P15/14;A61P31/04 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人： | 陈宏伟 |
| 地址： | 130011 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 金黄色葡萄球菌感染 奶牛乳腺炎 乳腺表达 乳腺组织 重组质粒 细菌 应用 金黄色葡萄球菌 乳腺生物反应器 表达重组质粒 基因工程领域 基因重组质粒 特异性启动子 蜂窝状孔道 特异性表达 动物乳腺 高效表达 类化合物 乳腺细胞 外源基因 乳腺炎 沙门菌 生物膜 新途径 心磷脂 防治 崩解 多肽 构建 减毒 预防 治疗 死亡 安全 发现 | ||
1.一种GSDMD-N基因重组质粒，其核苷酸序列如SEQ no.1所示。
2.如权利要求1所述的一种GSDMD-N基因重组质粒的制备方法，包括以下步骤：
（1）GSDMD-N及相关基因的引物合成；
引物如下：
GSDMD-N-F GAATTCATGCCATCGGCCTTTGAG]]> GSDMD-N-R GGATCCATCTGACAGGAGACTGAGC]]> WAP-F CTCGAGGGCCACAGTGAAGACCT]]> WAP-R GAATTCGGTGTCGGCGGCGG]]> EGFP+His-F GGATCCATGGTGAGCAAGGGCG]]> EGFP+His-R GGCCGCTTAATGATGATGGTGATGATGCTTGTACAGCTCGTCCAT]]>
（2）GSDMD-N及相关基因片段的Pcr扩增；
（3）将各片段连接到克隆载体上构成含有pEGFP-GSDMD-N-WAP-His的重组质粒，Pcr及双酶切电泳图证明重组质粒构建成功。
3.如权利要求1所述的GSDMD-N基因重组质粒在乳腺细胞表达的方法，包括以下步骤：
（1）通过电转将重组质粒转入减毒沙门菌SL7207中；
（2）利用携带重组质粒的减毒沙门菌SL7207侵染牛乳腺细胞；
（3）western blot检测证明GSDMD-N基因重组质粒在乳腺细胞表达成功。
4.如权利要求1所述的GSDMD-N基因重组质粒在乳腺表达的方法，其特征在于：
获得了携带GSDMD-N重组质粒的重组减毒沙门菌，使得重组质粒通过减毒沙门菌介导从而使得GSDMD-N在乳腺表达。
5.如权利要求1所述的GSDMD-N基因重组质粒在治疗由金黄色葡萄球菌感染的奶牛乳腺炎药物的用途。
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