[发明专利]一种快速生产葡萄脱毒种苗的培养基及组培量产方法

说明书

本发明涉及一种快速生产葡萄脱毒种苗的组织培养方法，该培养方法主要利用初代培养基、继代培养基和生根培养基进行培养。本申请通过优化培养基中生长激素组合及其浓度，同时通过优化组培方法，有效缩短了脱毒苗快速繁殖流程，提高了单位时间的繁殖系数，缩短移栽时间，使得从生根到移栽由原来的40d减少到30d左右，繁殖系数稳定在4.5，总体生根率稳定在100％左右，移栽成活率达到90％左右，表现出较好的组培生产效果。

技术领域

本发明涉及一种培养基及其组培方法，具体涉及一种快速生产葡萄脱毒种苗的培养基及组培量产方法。

背景技术

葡萄是水果中的珍品，是世界四大水果之一。截至2011年我国葡萄种植面积达828万亩，总产量843万吨。以现有的发展势头，再过7至10年，中国的葡萄“赤霞珠”面积将达到1000万亩，产量将突破1000万吨，总产量将位居世界第一。

赤霞珠(Cabernet Sauvignon)是世界著名的红葡萄酒品种之一。赤霞珠属欧亚种，别名：解百纳、解百纳索维浓，和蛇龙珠、品丽珠同姐妹系。赤霞珠葡萄是晚熟品种，皮厚而黑，果粒小，果皮和果汁比例比别的葡萄都高，所以它能酿造出颜色深、浓郁、单宁重的红葡萄酒。由它酿制的高档干红葡萄酒，淡宝石红，澄清透明，具青梗香，滋味醇厚，回味好，品质上等，是法国栽培最广的古老而传统的高档酿酒葡萄品种。

在实际生产中，葡萄“赤霞珠”易遭受多种真菌、细菌、病毒的侵染，易感霜霉病、白粉病、炭疽病等病害，严重影响葡萄“赤霞珠”的产量和质量，影响种植者的利益。

利用组织培养技术进行脱毒种苗的生产是生产优良葡萄“赤霞珠”种苗的重要手段。但是长期以来，脱毒苗生产受到了流程繁琐、周期长、技术难度大等因素的影响，导致了在生产中难于推广。同时，现有组培化生产研究中，由于不同物种组培条件不一，缺乏较为统一性的规律可以遵循，多侧重于针对不同物种、不同品种的培养基成分和培养条件的试验研究。

因此，对于葡萄“赤霞珠”脱毒苗快速繁殖组培体系，尚需进一步对培养基及对应的组织培养方法进行优化调整，以建立稳定的量产技术体系。

发明内容

本发明提供一种快速生产葡萄脱毒种苗的培养基，包括初代培养基、继代培养基和生根培养基，其特征在于,所述初代培养基以1/2MS为基本培养基，附加有：6-BA 0～0.4mg/L、IBA 0.2～1.3mg/L、蔗糖20～40g/L、琼脂5～7g/L；所述继代培养基以1/2MS为基本培养基，附加有蔗糖30～50g/L、琼脂5～7g/L，NAA 0.03～0.07mg/L、IBA0.2～0.5mg/L；所述生根培养基以1/2MS为基本培养基，附加有NAA 0.02～0.2mg/L，IBA 0.2～0.5mg/L、蔗糖20～40g/L、琼脂5～7g/L。

进一步，所述初代培养基具体为1/2MS培养基、6-BA 0.2mg/L、IBA0.5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L；所述继代培养基具体为1/2MS培养基、蔗糖40g/L、琼脂6g/L、NAA 0.05mg/L、IBA0.5mg/L；所述生根培养基具体为1/2MS培养基、NAA 0.2mg/L、IBA 0.5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L。

本发明还提供了一种葡萄脱毒苗快繁组织培养量产方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：

(1)初代培养：以葡萄脱毒苗带腋芽茎段为外植体，灭菌后利用初代培养基进行初代培养，培养25～35天左右至形成若干不定芽丛；

(2)继代培养：切取步骤(1)中初代培养后的茎段，转接至继代培养基上，进行继代扩繁培养；

(3)生根、炼苗：切取步骤(2)中继代培养后生长健壮的单芽幼苗，接种到生根培养基上，诱导生根并进行生根炼苗培养；

(4)移栽：将步骤(3)中生根、炼苗后组培幼苗，进行移栽育苗。