[发明专利]一种提高外源蛋白表达量的蛋白合成体系及其应用方法

权利要求书

1.一种提高外源蛋白的表达量的体外蛋白合成体系，所述合成体系至少包括细胞裂解产物，所述细胞裂解产物来自于基因工程细胞，所述基因工程细胞的基因序列中整合有在编码eIF4E结合蛋白的核苷酸序列前插入强启动子序列构建的多核苷酸序列；且该合成体系中不添加或额外添加eIF4E结合蛋白。

2.根据权利要求1所述的合成体系，其特征在于：所述强启动子序列选自GAPDH1、HXK1、PGK1、TEF1、TIF1、ADH1、SED1之一或其组合。

3.根据权利要求2所述的合成体系，其特征在于：所述强启动子序列选自pScGAPDH1、pKlHXK1、pKlPGK1、pScPGK1、pScSED1、pScADH1、pKlGAPDH1之一或其组合。

4.根据权利要求1-3的任意一项所述的合成体系，其特征在于：所述的eIF4E结合蛋白为Eap1p、p20、4E-BP1、4E-BP2、PHAS-I的一种或其组合。

5.根据权利要求1-3的任意一项所述的合成体系，其特征在于：所述细胞为真核细胞。

6.根据权利要求5所述的合成体系，其特征在于：所述真核细胞为哺乳动物细胞、植物细胞、酵母细胞、昆虫细胞之一或其任意组合。

7.根据权利要求6所述的合成体系，其特征在于：酵母选自酿酒酵母、克鲁维酵母属酵母之一或其组合。

8.根据权利要求7所述的合成体系，其特征在于：所述克鲁维酵母属酵母选自乳酸克鲁维酵母、马克斯克鲁维酵母、多布克鲁维酵母之一或其任意组合。

9.一种体外合成蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(i)提供一蛋白合成体系，其中所述的合成体系为权利要求1-8的任一合成体系；和

(ii)在适合表达蛋白的条件下，在编码所述外源蛋白的DNA或RNA模板存在下，孵育所述体外蛋白合成体系，从而表达所述的外源蛋白。

10.根据权利要求9所述的体外蛋白合成方法，其特征在于，所述方法还包括：(iii)分离或检测所述外源蛋白。