[发明专利]温敏细胞培养表面及其制备方法

说明书

本发明涉及一种温敏细胞培养表面及其制备方法。该温敏细胞培养表面的制备方法包括以下步骤：1)将温敏单体、交联剂加入溶剂中，混合均匀即得所述温敏液；2)将细胞培养装置放入等离子发生器内进行等离子处理，处理时间为15s～30s；3)将所述温敏液均匀的涂布在表面预处理后的所述细胞培养装置的培养面上；4)将涂布处理后的所述细胞培养装置置于高能电子发射器中进行高能电子束辐射接枝处理；5)对辐照处理后的所述细胞培养装置进行清洗。本发明的温敏细胞培养表面的制备方法能够让温敏液均匀涂布在细胞培养表面，确保温敏细胞培养表面各处的温敏功能平衡。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，特别是涉及一种温敏细胞培养表面及其制备方法。

背景技术

体外动物细胞培养是生物医药产业及其相关研究领域的一种常用技术。随着人们对生物制药产业和相关研究领域需求的日益增加，细胞培养相关领域的发展也日渐繁荣。细胞培养相关的耗材、装置和设备是细胞培养过程中必需的物品，目前用于细胞培养的产品主要包括小规模的细胞培养装置，例如细胞培养皿、细胞培养瓶、细胞培养板；以及大规模的细胞培养类产品主要包括细胞工厂(例如Thermofisher和Corning公司的细胞工厂高达40层的细胞培养表面)、粉末微载体颗粒(例如GE生命科学的Cytopore、Cytoline、Cytodex类产品的细胞培养面积可达2000cm²/g)等。

传统的细胞培养装置在细胞培养完成后，大多采用以下两种方式收获细胞：一是机械方式，例如直接采用细胞刮刀刮下细胞培养表面的细胞；二是生物方式，采用添加蛋白酶类消化液(例如胰蛋白酶)对细胞的贴壁层蛋白进行消化以使细胞贴壁层膜蛋白遭到破坏，从而使细胞从细胞培养表面上脱落下来，最后添加一定量的血清终止多余的蛋白酶的消化作用。但上述细胞收获方式中，机械方式在收获时容易刮伤细胞，造成细胞形态及活性的破坏；而生物方式在收获时，蛋白酶的消化一方面会破坏细胞外基质使细胞的结构和功能遭受一定程度的破坏，另一方面蛋白酶消化后会残留一些消化生成的化学物质而降低了细胞培养类产品的纯度，且成本较高。

为了克服传统细胞培养表面在收获细胞时存在的缺陷，温度响应性细胞培养表面的研究越来越受到人们的关注。温度响应性细胞培养表面在完成细胞培养后，只需要将培养环境的温度降低到最低临界温度以下即可实现细胞的收获。温度响应性细胞培养表面收获细胞时既不会损害细胞外基质，也不会残留胰酶消化时生成的化学物质。温度响应性细胞培养表面在制备时，需要将温敏液均匀地涂布到细胞培养表面上，但在实际操作中，温敏液往往会发生回缩，聚集堆积在细胞培养表面，温敏液聚集区域在温度达到最低临界温度后，细胞仍不能脱落；而温敏液稀疏区域在温度还未达到最低临界温度前，就已经有细胞开始脱落，导致细胞培养表面各处温敏功能的不平衡。

发明内容

基于此，有必要针对现有温度响应性细胞培养表面存在的温敏单体涂布不均匀的问题，提供一种温敏单体涂布均匀的温敏细胞培养表面及其制备方法。

具体的技术方案如下：

一种温敏细胞培养表面的制备方法，包括以下步骤：

1)温敏液的制备：将温敏性单体、交联剂加入极性溶剂中，混合均匀即得所述温敏液；

2)表面预处理：将细胞培养装置放入等离子发生器内进行等离子处理，处理时间为15s～30s；

3)涂布处理：将所述温敏液均匀的涂布在表面预处理后的细胞培养装置的培养面上；

4)辐照处理：将涂布处理后的细胞培养装置置于高能电子发射器中进行高能电子束辐射接枝处理；

5)清洗处理：对辐照处理后的所述细胞培养装置进行清洗。

在其中一个实施例中，所述表面预处理的处理时间为20s～30s。