[发明专利]胰岛细胞抗体检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种胰岛细胞抗体检测试剂盒及其制备方法，属于免疫诊断技术领域。该试剂盒包括：校准品、链霉亲和素磁颗粒悬浮液、化学发光标记物标记的抗人IgG抗体和偶联标记的胰岛细胞抗原。本发明还提供一种胰岛细胞抗体检测试剂盒的制备方法。采用本方法制备的试剂盒具有较高的检测灵敏度，操作简单、定量检测准确、快速，从检测到出结果只需20分钟；采用顺磁性的微粒作为固相载体，其比表面积大，提高了检测的灵敏度。

技术领域

本发明属于免疫诊断技术领域，具体涉及一种胰岛细胞抗体检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

Ⅰ型糖尿病(T1DM)是易感个体胰岛β细胞自身免疫性损害所致,呈现胰岛素(Ins)分泌逐渐减少或缺乏。胰岛细胞抗体(ICA)是T1DM患者体液免疫异常时可在血清中检测到的抗体之一,是缓慢进展的β细胞损伤的血清学标志。胰岛由多种内分泌细胞组成,β细胞分布于胰岛中央,分泌胰岛素,位于胰岛周边的α细胞也参与胰岛素分泌的调控。ICAs按其与胰岛细胞结合的部位可分为胰岛细胞胞浆抗体(ICA)与胰岛细胞表面抗体(ICSA)两类。ICA阳性提示β细胞出现自身免疫损害,因此是T1DM的预测指标。胰岛细胞抗体(ICA)作为一类自身抗体,发现于1974年,当时认为与胰岛的所有细胞均存在反应。1型糖尿病的儿童中,70％～80％在明确诊断时ICA为阳性。在成年发病的糖尿病人群中,2型糖尿病占绝大多数,但约有10％～25％具有2型糖尿病临床表型的患者在诊断糖尿病时被证实存在胰岛的自身免疫反应。ICA是这些患者体内存在的标志性抗体。这其中包括一部分成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)患者。但这部分病人的临床表现也各有不同。现公认ICAs对IDDM易感个体的鉴定、IDDM发生与发展的监测、糖尿病分型及早期IDDM的免疫抑制治疗及胰腺或胰岛移植的适宜时间的选择及移植后移植物功能存活的监测等均有重要的价值。

目前ICA的测定,但方法不尽相同,有免疫荧光、免疫组化及酶联免疫吸附法(ELISA)三大类。主要检测方法有间接免疫荧光(IF)、酶标法、免疫组化技术、ELISA方法，但实际应用中都均存在一些固有缺陷,其中，IF法荧光易猝灭,切片背景不清晰,不能长期保存,定位困难,而且有造成判断上的困难等缺点；酶标法的免疫组化技术操作比较复杂,且O型血人胰腺来源较为困难；ELISA方法对ICA抗体进行检测,准确性及重复性不稳定,尚需进一步验证。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有的ICA的检测方法准确性及重复性不稳定的问题，而提供一种胰岛细胞抗体检测试剂盒及其制备方法。

为达到以上目的，本发明提供以下技术方案：

本发明首先提供一种胰岛细胞抗体检测试剂盒，该试剂盒包括：校准品、链霉亲和素磁颗粒悬浮液、化学发光标记物标记的抗人IgG抗体和偶联标记的胰岛细胞抗原。

优选的是，所述的试剂盒中，链霉亲和素磁颗粒的质量分数是0.007％～0.1％。

优选的是，所述的链霉亲和素磁颗粒悬浮液中，链霉亲和素磁颗粒的粒径为0.05～1μm。

优选的是，所述化学发光标记物标记的抗人IgG中，抗人IgG为鼠抗人IgG或羊抗人IgG。

优选的是，所述的化学发光标记物标记的抗人IgG中，抗人IgG抗体与化学发光标记物的摩尔比为1:3～20。

优选的是，所述化学发光标记物为吖啶酯和三联吡啶钌。

优选的是，所述偶联标记的胰岛细胞抗原中，胰岛细胞抗原与偶联标记物的摩尔比为1:5～20。

优选的是，所述偶联标记物为生物素。

优选的是，所述的试剂盒还包括化学发光预激发液A、化学发光激发液B及清洗液，所述化学发光激发液A为硝酸溶液，化学发光激发液B为氢氧化钠溶液；清洗液为PB。

本发明还提供一种胰岛细胞抗体检测试剂盒的制备方法，包括：