[发明专利]用于检测CYP2C9和VKORC1基因分型的引物组、试剂、试剂盒及检测方法和应用

权利要求书

1.一种用于检测CYP2C9和VKORC1基因分型的引物组，其特征在于，所述引物组包括CYP2C9共用下游引物、CYP2C9等位基因特异引物和CYP2C9中间序列特异引物；以及，VKORC1共用下游引物、VKORC1等位基因特异引物和VKORC1中间序列特异引物；

所述CYP2C9共用下游引物为CYP2C9-acR，具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

所述CYP2C9等位基因特异引物包括CYP2C9-aF和CYP2C9-cF，所述CYP2C9-aF具有如SEQID NO.2所示的核苷酸序列，所述CYP2C9-cF具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；

所述CYP2C9中间序列特异引物为CYP2C9-mid，具有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；

所述VKORC1共用下游引物为VKORC1-ctR，具有如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；

所述VKORC1等位基因特异引物包括VKORC1-cF和VKORC1-tF，所述VKORC1-cF具有如SEQID NO.6所示的核苷酸序列，所述VKORC1-tF具有如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列；

所述VKORC1中间序列特异引物为VKORC1-mid，具有如SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述CYP2C9等位基因特异引物CYP2C9-aF和CYP2C9-cF，分别含有通用引物序列和与通用探针反向互补的序列；

优选地，所述CYP2C9-aF含有与FAM通用探针反向互补的序列，FAM信号代表A基因型，所述CYP2C9-cF含有与HEX通用探针反向互补的序列，HEX信号代表C基因型；

优选地，所述VKORC1等位基因特异引物VKORC1-cF和VKORC1-tF，分别含有通用引物序列和与通用探针反向互补的序列；

优选地，所述VKORC1-cF含有与FAM通用探针反向互补的序列，FAM信号代表C基因型，所述VKORC1-tF含有与HEX通用探针反向互补的序列，HEX信号代表T基因型。

3.一种用于检测CYP2C9和VKORC1基因分型的试剂，其特征在于，所述试剂包括权利要求1或2所述的引物组。

4.一种用于检测CYP2C9和VKORC1基因分型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述的试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括2*PCR Mix、2*UP-qPCR Mix、Primer Mix、CYP2C9qPrimer Mix、VKORC1qPrimer Mix、ddH₂O、CYP2C9阳性标准品和VKORC1阳性标准品。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述Primer Mix包括CYP2C9-acR、CYP2C9-aF、CYP2C9-cF、VKORC1-ctR、VKORC1-cF与VKORC1-tF，溶剂为灭菌双蒸水；

优选地，所述CYP2C9-acR、CYP2C9-aF、CYP2C9-cF、VKORC1-ctR、VKORC1-cF与VKORC1-tF的浓度均为1-3μM；

优选地，所述CYP2C9qPrimer Mix包括CYP2C9-mid，溶剂为灭菌双蒸水；所述VKORC1qPrimer Mix包括VKORC1-mid，溶剂为灭菌双蒸水；

优选地，所述CYP2C9-mid与VKORC1-mid的浓度均为5-10μM。

7.一种CYP2C9和VKORC1基因分型的检测方法，其特征在于，应用权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述的试剂或权利要求4-6任一项所述的试剂盒。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，以待测样本的DNA为模板，利用所述引物组进行实时荧光定量PCR反应，根据检测到的荧光信号判定CYP2C9和VKORC1的基因型。