[发明专利]用于检测CYP2C9和VKORC1基因分型的引物组、试剂、试剂盒及检测方法和应用

说明书

本发明提供了一种用于检测CYP2C9和VKORC1基因分型的引物组、试剂、试剂盒及检测方法和应用，涉及基因工程技术领域，本发明提供的引物组，包括共用下游引物、等位基因特异引物和中间序列特异引物。本发明利用通用探针技术开发的针对CYP2C9rs1057910与VKORC1rs9923231位点的基因分型引物组，具有开发成本低，研发周期短，准确性高等特点，能够满足临床检测所需要的准确度、精密度及检出率等要求。并且，该引物组具有特异性强，准确度高，DNA测定范围广的优点有利于推动针对该位点的华法林个体化用药基因的临床检测。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及一种用于检测CYP2C9和VKORC1基因分型的引物组、试剂、试剂盒及检测方法和应用。

背景技术

华法林是目前临床上广泛使用的香豆素类口服抗凝药，已被应用于多种疾病的抗凝治疗，如静脉血栓栓塞性疾病(VTE)的一级和二级预防、心房颤动血栓栓塞的预防、瓣膜病、人工瓣膜置换术和心腔内血栓形成等，但临床疗效和不良反应个体差异很大，剂量很难掌握，尤其是在使用华法林抗凝治疗初期，极易导致严重的出血并发症。据估计，服用华法林的患者中，每年有15.2％的人发生出血副作用，其中致命性的大出血占3.5％，不同个体间华法林稳定剂量的差异可达20倍以上。大量研究表明，华法林代谢酶CYP2C9基因和靶点基因VKORC1基因遗传多态性与其抗凝疗效密切相关，不同基因型患者所需华法林剂量差异明显。

其中，细胞色素P450酶2C9基因(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1基因(VKORC1)多态性分别解释约37％和6％的剂量差异。美国食品药品监督管理局(FDA)于2007年8月修改华法林用药标签，提示基因型检测有助于调整华法林给药剂量。2009年美国FDA再次修改华法林用药标签，并根据患者VKORC1和CYP2C9基因型确定华法林起始剂量。国际华法林药物基因组联合会(IWPC)收集了5700例来自4大洲9个国家的21个研究机构使用华法林达到稳定临床疗效的患者信息，并建立数据库。通过对此数据库的筛选和验证，建立了IWPC模型，是目前涉及病例规模最大的模型，该模型可解释华法林个体剂量差异47％。实践证明，依据患者基因型并结合患者临床信息进行华法林个体化给药，可明显提高华法林抗凝达标率，降低抗凝并发症，减少患者再住院率。因此，建议在使用华法林前进行CYP2C9和VKORC1基因检测，依据患者基因型指导华法林给药剂量。

因此，CYP2C9和VKORC1基因多态性检测对于华法林用药有重要意义。目前华法林代谢敏感型基因CYP2C9和VKORC1分型检测常用方法为Taqman探针-qPCR法，该方法是利用位点特异性Taqman探针来完成基因分型检测。然而，Taqman探针-qPCR方法具有开发成本高、周期长等缺点，使得基于该方法的临床基因检测成本较高，限制了基因检测技术的临床推广。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测CYP2C9和VKORC1基因分型的引物组，以缓解现有技术中存在的Taqman探针-qPCR检测CYP2C9和VKORC1基因分型具有开发成本高、周期长的技术问题。

本发明的第二个目的在于提供一种用于检测CYP2C9和VKORC1基因分型的试剂。

本发明的第三个目的在于提供一种用于检测CYP2C9和VKORC1基因分型的试剂盒。

本发明的第四个目的在于提供一种CYP2C9和VKORC1基因分型的检测方法，该方法工艺简单，操作方便，检测成本低，同时能够满足临床检测所需要的准确度、精密度及检出率等要求。

本发明的第五个目的在于提供上述引物组或试剂或试剂盒在检测个体对硝酸甘油药物敏感性中的应用。