[发明专利]大黄鱼清道夫受体基因MARCO基因及其免疫防御功能

说明书

本发明公开了大黄鱼清道夫受体基因MARCO基因及其免疫防御功能，MARCO基因开放阅读框序列采用同源克隆法与RACE技术克隆获得，其序列如SEQ ID NO:1所示，全长为1218 bp，编码405个氨基酸，上述MARCO基因在大黄鱼免疫防御功能中的用途；免疫防御功能包括调节先天免疫维护机体的健康与进化。有益效果为：本发明采用同源克隆法与RACE技术克隆获得MARCO基因，克隆过程中总RNA提取效果好，能灭活内源RNA酶，提高总RNA的得率和纯度；MARCO基因免疫防御功能，为预防病原菌引起的疾病提供理论基础，也为揭示大黄鱼健康养殖提供理论指导。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及大黄鱼清道夫受体基因MARCO基因及其免疫防御功能。

技术背景

大黄鱼（Larimichthys crocea）广泛分布于我国东南沿海，俗称“黄花鱼”，肉质鲜嫩爽滑，营养价值高，是百姓餐桌上的常见食用鱼，在经历了从资源紧缺状态到后来大规模人工养殖以及大力开拓国内外市场后，大黄鱼的经济地位不断提升，其人工养殖也越来越受到广泛关注，但养殖大黄鱼通常离不开抵抗病原菌的问题，因而免疫相关基因的开发和利用尤显重要。基于大黄鱼的全基因组测序的完成，人们对大黄鱼的基因研究上了一个新台阶，大黄鱼先天性免疫基因特征也逐渐被解析，其中作为免疫防御第一防线的模式识别受体（Pattern recognition receptors，PRRs）尤为关键，该类分子通过两种模式防止感染和识别内部损伤：即病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）和损伤相关分子模式（damage-associated molecular patterns，DAMPs）。清道夫受体（Scavenger Receptors，SRs）是第一个被描述的PRRs，SRs是多种结构功能各异的蛋白分子的统称，能结合、转移、在细胞内降解乙酰化/氧化修饰的低密度脂蛋白（acetylated lowdensity lipoproteins，AcLDL/oxidised low density lipoproteins OxLDL），并能与多种配体结合发挥不同作用。目前发现的清道夫受体大致有A到H共8类，称为清道夫受体家族，另有I、J类仍处于探索阶段。该家族成员在内皮细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞、血细胞、破骨细胞、脂肪细胞、树突状细胞、血小板等细胞中发现清道夫受体家族成员表达调控。其中A类清道夫受体的一种MARCO的胞外区缺少α-螺旋卷曲motif，为胶原样结构域，这些都跟受体三聚体的形成密切相关，在C末端含有6个保守的半胱氨酸，并都有一个SRCR结构域，与SR-AI结构有较大的相似性。MARCO在脾脏边缘区的巨噬细胞中大量表达，而脾脏是人体最大的周围淋巴器官，该边缘区位于白髓和红髓的交界处，分布着丰富的巨噬细胞、树突状细胞和B淋巴细胞，边缘区的边缘窦是最早接触和识别抗原的部位，因此可以判断在边缘区高表达的MARCO参与机体的免疫反应，起到识别病原体的重要作用。MARCO与PAMPs的结合主要与SRCR结构域有关，可以结合革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，还能结合石英颗粒和乳胶微球等。有报道称，人和鼠的MARCO基因在敲除SRCR结构域后，将不能正确识别和结合相应的配体。因此研究MARCO基因及其相关免疫功能对进一步阐明大黄鱼的固有免疫系统调控机制、掌握MARCO基因对大黄鱼免疫代谢的影响奠定基础。同时，为预防病原菌引起的疾病提供理论基础，也为揭示大黄鱼健康养殖提供理论指导。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种大黄鱼清道夫受体基因MARCO基因，其采用同源克隆法与RACE技术克隆获得，克隆过程中总RNA提取效果好，能灭活内源RNA酶，不会引起RNA的降解，保持RNA的完整性，提高总RNA的得率和纯度。

本发明的目的之二在于提供一种MARCO基因在大黄鱼免疫防御功能中的用途，为预防病原菌引起的疾病提供理论基础，也为揭示大黄鱼健康养殖提供理论指导。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：