[发明专利]一种分离鉴定白酒酒糟中的水溶性多肽的方法

权利要求书

1.一种分离鉴定白酒酒糟中的水溶性多肽的方法，其特征在于，所述水溶性多肽为五肽或者六肽，具体包括：SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO4、SEQ ID NO7、SEQ ID NO11、SEQ ID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO15、SEQ ID NO16、SEQ ID NO17、SEQ ID NO19、SEQID NO20、SEQ ID NO25、SEQ ID NO26中的任意一种或两种以上；

所述方法包括：将白酒酒糟进行前处理、半制备RP-HPLC分离酒糟中的水溶性肽、通过LC-QTOF-MS并利用质谱软件Biolynx解析鉴定分离出的水溶性肽；

所述前处理包括：按照酒糟与水质量比2:1添加超纯水，搅拌后第一次离心过滤后，取上清液，第二次离心过滤后，取下层溶液，真空旋转蒸发，浓缩，冻干后复溶至浓度100mg/mL；

所述半制备RP-HPLC的条件为：色谱柱：规格为10mm×250mm，5μm的Xbridge BEH C18反相色谱柱；流动相：A含体积分数0.1％TFA的超纯水、B含体积分数0.08％TFA的乙腈；洗脱程序：0～60min，90％～40％A；60～70min，40％～90％A；

所述LC-QTOF-MS的条件为：色谱柱：2.1mm×100mm，1.7μm BEH C18反相色谱柱；流动相：A100％乙腈、B含体积分数0.1％甲酸的超纯水；洗脱梯度：0～0.1min，2％A；0.1～8min，2％～40％A；8～10min，40％～80％A；10～12min，80％～100％A；12～12.1min，100％～2％A；

所述利用质谱软件Biolynx解析鉴定分离出的水溶性肽，采用正离子[M+H]⁺和负离子[M-H]^–两种模式，对比正负离子模式在同一保留时间下的质谱图，判断母离子m/z的大小。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一次离心条件为：离心温度3～5℃、离心力3800g、离心时间25～35min；所述第二次离心条件为：离心温度3～5℃，离心力10000g，离心时间15～25min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述二次离心过滤分别采用孔径大小分别为3KD和1KD的超滤管进行先后超滤，最终截留分子量>1kD。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述半制备RP-HPLC分离酒糟中的水溶性肽，包括：将前处理得到的溶液稀释至浓度20mg/mL；色谱柱：流速：2mL/min；检测波长：214nm；柱温：20℃；进样量：800μL。

5.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述利用质谱软件Biolynx解析鉴定分离出的水溶性肽，包括：将分离后得到的溶液旋蒸、冻干，并复溶，待UPLC-Q-TOF-MS分析；色谱柱：流速：0.3mL/min；检测波长：200～500nm；柱温：45℃；进样量：5μL；

质谱条件：离子源：电喷雾源；毛细管电压：3500V；锥孔电压：20V；模式：正负离子双模式；离子源温度：100℃；脱溶剂气温度：400℃；碰撞池电压：6V；离子扫描范围：m/z 20～2000。

6.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述半制备RP-HPLC分离酒糟中的水溶性肽，选用波长214nm表征多肽的分离效果。