[发明专利]一种分离鉴定白酒酒糟中的水溶性多肽的方法

说明书

本发明公开了一种分离鉴定白酒酒糟中的水溶性多肽的方法，属于多肽提取技术领域。本发明通过对浓香型白酒酒糟采用半制备RP‑HPLC分离酒糟中的水溶性肽、并利用质谱软件Biolynx解析鉴定分离出的水溶性肽，分离并鉴定出白酒酒糟中包含31种水溶性多肽，其中包括6种血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽AAPK、KAGP、TVPK、YE、VPGK、TPF，2种抗氧化肽VPSGK、LH和1种抑制紫外线引起的红斑的功能短肽HP；表明白酒酒糟能富集更多的生物活性肽，为白酒酒糟深加工或高附加值利用提供理论基础。

技术领域

本发明涉及一种分离鉴定白酒酒糟中的水溶性多肽的方法，属于多肽提取技术领域。

背景技术

白酒酒糟是高粱蒸煮加曲后经固态发酵、蒸馏后的残渣，含有较丰富的营养成分，包括粗蛋白、脂肪、糖类、维生素、无机盐和许多风味物质等，如鲜酒糟中粗蛋白含量约为6.99％，干酒糟中粗蛋白含量高达16.78％。

早期研究大都关注酒糟中蛋白、淀粉、脂肪等常规营养成分的分析，上世纪八十年代始，日本人开始研究清酒糟的多肽，并在清酒糟中发现抗高血压的ACE抑制肽；多肽是是氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。人体很多活性物质都是以肽的形式存在的。肽涉及人体的激素、神经、细胞生长和生殖各领域，其重要性在于调节体内各个系统和细胞的生理功能，激活体内有关酶系，促进中间代谢膜的通透性，或通过控制DNA转录或影响特异的蛋白合成，最终产生特定的生理效应。肽是涉及人体内多种细胞功能的重要物质。肽可以合成细胞，并调节细胞的功能活动。

但对于白酒酒糟中多肽成分的研究尚未见报道。

发明内容

为了解决目前存在的问题，本发明的第一个目的在于提供一种分离鉴定白酒酒糟中的水溶性多肽的方法，所述方法包括：将白酒酒糟进行前处理、半制备RP-HPLC分离酒糟中的水溶性肽、利用质谱软件Biolynx解析鉴定分离出的水溶性肽。

可选的，所述前处理包括：按照酒糟与水质量比2:1添加超纯水，搅拌后第一次离心过滤后，取上清液，第二次离心过滤后，取下层溶液，真空旋转蒸发，浓缩，冻干后复溶至浓度100mg/mL。

可选的，所述第一次离心条件为：离心温度3～5℃、离心力3800g、离心时间25～35min；所述第二次离心条件为：离心温度3～5℃，离心力10000g，离心时间15～25min。

可选的，所述第二次离心过滤分别采用孔径大小分别为3KD和1KD的超滤管进行先后超滤，最终截留分子量>1kD。

可选的，所述半制备RP-HPLC分离酒糟中的水溶性肽，包括：将前处理得到的溶液稀释至浓度20mg/mL；

色谱柱：规格为10mm×250mm，5μm的Xbridge BEH C18反相色谱柱；流动相：A 含体积分数0.1％TFA的超纯水、B含体积分数0.08％TFA的乙腈；洗脱程序：0～60min， 90％～40％A；60～70min，40％～90％A；流速：2mL/min；检测波长：214nm；柱温：20℃；进样量：800μL。

可选的，所述利用质谱软件Biolynx解析鉴定分离出的水溶性肽，包括：将分离后得到的溶液旋蒸、冻干，并复溶，待UPLC-Q-TOF-MS分析；

色谱柱：2.1mm×100mm，1.7μm BEH C18反相色谱柱；流动相：A100％乙腈、B超纯水(0.1％甲酸)；洗脱梯度：0～0.1min，2％A；0.1～8min，2％～40％A；8～10min，40％～80％A；10～12min，80％～100％A；12～12.1min，100％～2％A；流速：0.3mL/min；检测波长：200～500nm；柱温：45℃；进样量：5μL；