[发明专利]一种猫干扰素ω及其制备方法和在抗病毒中的应用

权利要求书

1.一种猫干扰素ω，其特征在于，所述的猫干扰素ω的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.编码权利要求1所述的猫干扰素ω的核苷酸序列。

3.如权利要求2所述的核苷酸序列，其特征在于，所述的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.一种重组表达载体，其特征在于，含有权利要求2或3所述的核苷酸序列。

5.一种宿主细胞，其特征在于，含有权利要求4所述的重组表达载体。

6.权利要求1所述的猫干扰素ω在制备抗病毒药物中的应用，其特征在于，所述的药物用于治疗或预防猫的病毒感染性疾病。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的病毒包括猫肠道冠状病毒和猫细小病毒。

8.一种制备权利要求1所述的猫干扰素ω的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)获得编码权利要求1所述的猫干扰素ω的核苷酸序列，并且在该序列的两端连接Kpn I和BamH I酶切位点；

(2)重组表达载体pCold-TF-ω的构建

分别将表达载体pCold-TF及步骤(1)获得的序列经限制性内切酶Kpn I和BamH I双酶切处理，采用DNA胶回收试剂盒回收目的基因片段，进而将步骤(1)获得的序列经T4连接酶连入表达载体pCold-TF，构建重组表达载体，命名为pCold-TF-ω；

(3)重组菌pCold-TF-ω/BL21的构建

将重组表达载体pCold-TF-ω转化BL21感受态细胞，涂布于含有氨苄抗性的LB琼脂平板进行培养，挑选阳性重组菌，命名为pCold-TF-ω/BL21；

(4)诱导表达

过夜涂板活化重组菌pCold-TF-ω/BL21，挑取单菌落接种于含浓度为100μg/ml氨苄的LB液体培养基中，37℃震荡培养过夜；取新培养菌液按体积比1:10比例转接至含氨苄抗性的LB液体培养基中，37℃培养至OD₆₀₀0.4-0.6时，加入终浓度为1mmol/L的IPTG，37℃诱导6h；取诱导后的重组菌液，离心，弃上清，加入PBS重悬菌体并进行超声处理，然后加入5×SDS样品裂解液，沸水浴10min，离心，取上清，将重组融合蛋白经His-tag标签亲和纯化，再经HRV 3C蛋白酶处理及His-tag标签亲和纯化，最终获得所述的猫干扰素ω。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，编码权利要求1所述的猫干扰素ω的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。