[发明专利]一种猫干扰素ω及其制备方法和在抗病毒中的应用

说明书

本发明公开了一种猫干扰素ω及其制备方法和在抗病毒中的应用。所述的猫干扰素ω的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。优选的，编码所述的猫干扰素ω的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。此外，本发明还公开了一种制备所述的猫干扰素ω的方法及其在制备抗病毒药物中的应用。本发明采用病毒刺激(猫肠道冠状病毒)结合干扰素诱生剂刺激(聚肌胞poly I:C)方法对宠物猫体进行刺激，进而诱导猫干扰素基因表达。然后通过PCR扩增得到了一条猫干扰素ω基因，细胞试验显示本发明获得的一种猫干扰素ω具有明显的抗病毒活性，并优于现有已知猫干扰素。本发明的提出为猫干扰素制品的进一步研发和应用奠定了基础。

技术领域

本发明涉及一种新型的猫干扰素ω及其制备方法和在抗病毒中的应用。本发明属于兽药技术领域。

背景技术

干扰素是机体受病毒感染时产生的一种抗病毒细胞因子，由被感染细胞释放以抑制病毒的增殖，具有广谱抗病毒和增强免疫应答的作用。现已确定的干扰素有两大类：I型和II型。I型干扰素主要包括IFN-α、IFN-β和IFN-ω；II型干扰素主要有IFN-γ。目前，人用干扰素研究进展迅速，如基因工程重组人干扰素α已被广泛用于人类病毒感染的治疗，重组人干扰素ω也已用于SARS的治疗。

近年来，我国宠物猫饲养量在增长迅速，已成为人们休闲生活一部分，而诸多病毒病却严重危害着宠物猫的健康和生存。干扰素是治疗病毒感染性疾病最为有效的治疗药物，而目前对猫干扰素的研究和临床制剂的开发还相对滞后，同时已公布的猫干扰素序列也比较有限。

本发明公开了一种新型猫干扰素ω及其编码基因序列，并通过基因工程方法制备了该新型猫干扰素以及进行了抗病毒活性测定，本发明为猫干扰素生物制品的研发提供了物质基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型的猫干扰素ω及其制备方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明采用病毒刺激(猫肠道冠状病毒)结合干扰素诱生剂刺激(聚肌胞poly I:C)方法对宠物猫体进行刺激，进而诱导猫干扰素基因表达。然后根据GenBank中已发布的猫干扰素ω基因序列，通过DNAMAN进行基因序列比对，使用Oligo6设计了一对简并引物用以扩增猫干扰素ω基因，最终本发明获得了一种新型的编码猫干扰素ω的基因序列，通过测序及BLAST比对发现，其与已发布的猫干扰素ω基因序列同源性较高，属于猫干扰素ω新成员，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过基因工程方法制备了该新型猫干扰素并对其进行了抗病毒活性测定，结果发现本发明的新型猫干扰素ω具有良好的抗病毒活性，有效抗病毒浓度为0.65mg/mL，优于已知猫干扰素，显示了良好的应用潜力。

在上述研究的基础上，本发明提出了一种新型的猫干扰素ω，所述的猫干扰素ω的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

编码所述猫干扰素ω的核苷酸序列、含有所述核苷酸序列的重组表达载体以及含有所述重组表达载体的宿主细胞也在本发明的保范围之内。其中，优选的，所述的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步的，本发明还提出了所述的猫干扰素ω在制备抗病毒药物中的应用。

其中，优选的，所述的药物用于治疗或预防猫的病毒感染性疾病。

其中，优选的，所述的病毒包括猫肠道冠状病毒和猫细小病毒。

更进一步的，本发明还提出了一种制备所述的猫干扰素ω的方法，包括以下步骤：

(1)获得编码所述猫干扰素ω的核苷酸序列，并且在该序列的两端连接Kpn I和BamH I酶切位点；

(2)重组表达载体pCold-TF-ω的构建