[发明专利]基于辅助质粒和PCR产物的蓝舌病病毒反向遗传拯救方法及其应用有效
| 申请号： | 201811128501.2 | 申请日： | 2018-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN109321598B | 公开（公告）日： | 2021-08-13 |
| 发明（设计）人： | 徐青元;葛金英;孙恩成;步志高 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心);哈尔滨维科生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N7/01;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京商专永信知识产权代理事务所(普通合伙) 11400 | 代理人： | 方挺;黄谦 |
| 地址： | 150069 黑龙江省哈尔滨市香坊*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 辅助 质粒 pcr 产物 蓝舌病 病毒 反向 遗传 拯救 方法 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种蓝舌病病毒反向拯救系统，其特征在于该系统含有蓝舌病病毒10个节段的扩增产物和7个辅助质粒，其中7个辅助质粒是通过将BTV VP1、VP3、VP4、VP6、VP7、NS1和NS2的开放阅读框插入真核表达质粒构建获得，所述10个节段PCR产物前面分别引入T7启动子，构建的PCR产物使T7细胞内转录产物与对应的蓝舌病病毒RNA完全一致，即病毒基因5’端第一个核苷酸位于T7启动子转录启始位置，3’端通过run-off方式保证了最后一个核苷酸与病毒基因的一致性。
2.一种蓝舌病毒反向拯救方法，该方法利用如权利要求1所述的蓝舌病病毒反向拯救系统进行两步细胞内转染，使得PCR产物转染的细胞利用细胞自身的RNA转录机制实现了细胞内的转录，所述两步细胞内转染包括第一步辅助质粒转染，第二步T7启动子连接的10病毒基因节段的转染。
3.如权利要求2所述的方法，该方法通过转染BSR细胞实现蓝舌病毒的拯救。
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