[发明专利]使用高效液相色谱法测定利伐沙班及其有关物质的方法

说明书

本发明提供了一种使用高效液相色谱法测定利伐沙班及其有关物质的方法，其中，所述高效液相色谱法包括以下条件：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A选自pH 5.0‑7.0的磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液或碳酸盐缓冲液；流动相B为乙腈或甲醇；进行梯度洗脱。本方法具有专属性好、灵敏度高、重现性好、后期数据处理简易等特点，尤其能解决空白溶剂干扰和个别杂质峰峰型差、分离度低等问题，并且能够实现一次进样即可得到全部含量和有关物质分析结果。

技术领域

本发明属于分析化学领域，涉及一种使用高效液相色谱法同时测定利伐沙班及其有关物质的方法及应用。

背景技术

利伐沙班(Rivaroxaban，商品名：Xarelto)是由拜耳公司和强生公司联合研制的口服抗凝药物，首次在加拿大上市，是全球第一个口服剂型的直接Xa因子抑制剂，至今已在50多个国家陆续上市，市场前景广阔。利伐沙班化学名为：5-氯-氮-[[(5S)-2-氧代-3-[4-(3-氧代吗啉-4-基)苯基]-1,3-噁唑啉-5-基]甲基]噻吩-2-甲酰胺，分子式为C₁₉H₁₈ClN₃O₅S，结构式如下所示：

在合成利伐沙班的过程中，一些已知结构的中间体或杂质和未知结构的杂质因去除不完全而残留，会影响利伐沙班的纯度和质量。在药物质量控制中，这些已知结构的中间体或杂质和未知结构的杂质以及利伐沙班的降解产物统称为有关物质，对于这些有关物质，不论在原料药还是其制剂中均需要严格的控制，以保证利伐沙班的产品质量。根据文献报道，目前行业内对于利伐沙班含量及有关物质的检测大都采用国家进口注册标准方法，但是该方法的最大缺点就是无法检测在C18色谱柱上呈现弱保留行为的一些杂质(如本发明化合物列表2中的杂质1、杂质2、杂质3等)，并且该方法的空白溶剂干扰主峰和杂质的检测，方法灵敏度低。

申请号为“201410746906.8”的发明专利公开了一种测定利伐沙班及其制剂中杂质的方法，所述的流动相A为三氟乙酸与磷酸二氢钠的混合溶液，并明确指出适用pH为4.4-4.6，该发明专利所检测的利伐沙班杂质只包含本发明所述的杂质3、杂质4和杂质7，经试验证明该方法并不能有效分离本发明所述的杂质1、杂质2和杂质3，而杂质1、2、3、4为利伐沙班杂质中最难分离的4个杂质。

基于现有技术，对于本发明所述的杂质1、2、3这种电离能力较强不易在反向色谱柱上保留的物质，一般的解决方案是添加离子对试剂以增加其在反向色谱固定相上的保留。专利CN105004802B公布了一种分离测定利伐沙班及其杂质的方法及应用，该方法是在流动相A中加入一定浓度的酸性离子对试剂，来解决在普通C18色谱柱上呈现弱保留行为的一些杂质无法检测这一问题，从而达到分离测定利伐沙班及其杂质的目的。但该方法仍然存在明显缺陷：首先，该方法对流动相pH比较敏感，仅在pH3.7-4.2之间有很好的分离效果(如实施例5中提到的当pH为3.6时，杂质B与G不能有效分离)，检测方法耐用性差。并且经实验验证该方法前几个流出的杂质组分峰对称性差，且保留时间重现性不好。其次，该方法仍然不能有效排除空白溶剂对利伐沙班及其有关物质检测的干扰问题，且该专利提到的定量限与检出限实验结果难以重复，实施例中也未给出定量限与检出限的典型图谱；再次，该方法在检测某些杂质(如本发明杂质列表2中的杂质6时)，响应值太小，检出限无法达到ICH关于杂质的限度检测的一般要求，方法检测灵敏度低。最后，该方法需要在流动相中加入离子对试剂来增强碱性含氮杂质在色谱柱上的保留。而离子对试剂会对色谱柱造成不可逆转的伤害，影响色谱柱固定相上的活性位点，不但影响方法的重现性和耐用性，而且大大地缩短了色谱柱的使用寿命。

基于以上原因，现有技术中，对利伐沙班及其有关物质的分离检测，所使用的方法均存在干扰峰影响、耐用性差、重现性差、检测的灵敏度低、并且计算过程中需要手动扣除空白溶剂等问题，对检测结果计算和判定造成很大的影响。

当前对步骤简单、灵敏度高、耐用性好、重现性好并且测定结果准确性高的利伐沙班及其有关物质的测定方法仍有迫切需求。