[发明专利]荧光蛋白的纯化方法

权利要求书

1.一种荧光蛋白的纯化方法，其特征在于，将细胞破壁液依次经沉淀和复溶处理后用离子交换层析进行纯化，得到所述荧光蛋白；

所述沉淀包括在所述细胞破壁液中加入Zn²⁺，至其终浓度为20 mmol/L，在7000-9000rpm条件下离心5-15 min，取沉淀得到沉淀蛋白；

所述复溶包括将经所述沉淀得到的沉淀蛋白用100mL Tris缓冲液进行溶解，得到复溶溶液的步骤，所述Tris缓冲液浓度为50 mmol/L；

所述细胞破壁液经过热处理后再进行细胞破壁液沉淀的步骤，所述热处理的条件包括：在60-70℃条件下，80-120 rpm孵育10-20 min；

所述细胞破壁液沉淀的条件包括：在7000-9000 rpm条件下离心5-15 min；

所述荧光蛋白为绿色荧光蛋白。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，将经所述沉淀得到的沉淀蛋白用Tris缓冲液进行溶解后，在7000-9000 rpm条件下离心5-15 min，取上清得到所述复溶溶液。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述离子交换层析的层析步骤包括：用NaCl浓度为90-110 mM的Tris缓冲液对结合有荧光蛋白的离子交换层析柱进行洗脱，洗脱得到的溶液为纯化的荧光蛋白。

4.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，先用NaCl浓度为40-60 mM的Tris缓冲液对结合有荧光蛋白的离子交换层析柱进行洗脱，再进行用NaCl浓度为90-110 mM的Tris缓冲液对结合有荧光蛋白的离子交换层析柱进行洗脱的步骤。

5.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，所述结合有荧光蛋白的离子交换层析柱通过将所述复溶得到的复溶溶液加入到离子交换层析柱得到。

6.根据权利要求5所述的纯化方法，其特征在于，所述离子交换层析柱在加入所述复溶溶液前经过Tris缓冲液平衡处理。

7.根据权利要求5所述的纯化方法，其特征在于，所述复溶溶液加入所述离子交换层析柱后还包括用Tris缓冲液冲洗所述结合有荧光蛋白的离子交换层析柱的步骤。

8.根据权利要求5所述的纯化方法，其特征在于，所述离子交换层析柱为阴离子交换层析柱。