[发明专利]一种鼠抗CD3重组免疫毒素及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201811129984.8 | 申请日： | 2018-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN109265564A | 公开（公告）日： | 2019-01-25 |
| 发明（设计）人： | 陈宏远;芮雯;陈鸿策;游思远 | 申请（专利权）人： | 广东药科大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K47/68;A61P37/02;A61P37/06;A61P35/00 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 崔红丽 |
| 地址： | 510006 广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组免疫毒素 鼠抗 制备方法和应用 单链抗体 免疫疾病 免疫耐受 自身性 靶向 小鼠 剔除 基因工程技术 生物技术领域 原核表达系统 优化密码子 淋巴结 结合方式 免疫毒素 免疫器官 模型建立 药学研究 移植免疫 应用意义 肿瘤治疗 器官移植 剔除鼠 外周血 亲和力 构建 偶联 外周 潜能 研究 治疗 转化 | ||
1.一种鼠抗CD3重组免疫毒素，其特征在于：所述重组免疫毒素包括2部分：一部分为细菌毒素或植物毒素，另一部分为scFv、Bi-scFv结构域或Foldback-scFv，两部分通过由四个甘氨酸和丝氨酸残基组成的接头进行连接得到；
所述的scFv的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；
所述的Bi-scFv的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；
所述的Foldback-scFv的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
2.根据权利要求1所述的鼠抗CD3重组免疫毒素，其特征在于：
所述的细菌毒素为白喉毒素、绿脓杆菌外毒素；所述的植物毒素为蓖麻毒素、相思豆毒素、白素毒素。
3.根据权利要求2所述的鼠抗CD3重组免疫毒素，其特征在于：
所述的细菌毒素为DT390，得到的鼠抗CD3重组免疫毒素分别命名为ScFv-CD3-DT390，Bi-CD3-DT390，Foldback-CD3-DT390；
所述的ScFv-CD3-DT390的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；
所述的Bi-CD3-DT390的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；
所述的Foldback-CD3-DT390的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示。
4.编码权利要求3所述的鼠抗CD3重组免疫毒素的基因，其特征在于：
所述的编码重组免疫毒素ScFv-CD3-DT390的基因如SEQ ID NO：8所示。
5.编码权利要求3所述的鼠抗CD3重组免疫毒素的基因，其特征在于：
所述的重组免疫毒素Bi-CD3-DT390的基因如SEQ ID NO：9所示。
6.编码权利要求3所述的鼠抗CD3重组免疫毒素的基因，其特征在于：
所述的重组免疫毒素Foldback-CD3-DT390的基因如SEQ ID NO：10所示。
7.含权利要求4、5或6所述的基因的载体。
8.含有权利要求7所述的载体的宿主细胞。
9.权利要求3所述的鼠抗CD3重组免疫毒素的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)对权利要求3所述的鼠抗CD3重组免疫毒素的氨基酸序列分别进行优化，设计了如SEQ ID NO：8～SEQ ID NO：10所述的基因，另外在5′端引入KpnI酶切位点以及引入EK识别位点-(Asp)4Lys编码序列并设计上起始密码子ATG；在3′端设计上6个组氨酸的密码子CGTCGTCGTCGTCGTCGT、终止密码子TAATGA并引入XhoI酶切位点；
(2)目的基因采用pET-30a(+)表达载体进行构建重组表达载体；
(3)将重组表达载体转化宿主菌后诱导表达、纯化，获得鼠抗CD3重组免疫毒素。
10.权利要求1、2或3所述的鼠抗CD3重组免疫毒素、权利要求4、5或6所述的基因、权利要求7所述的载体、权利要求8所述的宿主细胞在制备小鼠T淋巴细胞剔除、自身性免疫疾病、器官移植、免疫耐受及肿瘤治疗的药物中的应用。
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