[发明专利]结直肠癌血清标志物、表达评估方法、试剂盒及应用

说明书

本发明属于癌症检测技术领域，具体涉及一种结直肠癌血清标志物、表达评估方法、试剂盒及应用，该结直肠癌血清标志物为CCL20趋化因子和IL17A细胞因子，通过对CCL20和IL17A两种炎症因子的联合检测，有利于对早期结直肠癌患者进行无创性诊断，并对预后作出评估。

技术领域

本发明属于癌症检测技术领域，具体涉及一种结直肠癌血清标志物、表达评估方法、试剂盒及应用。

背景技术

结直肠癌最常见的恶性肿瘤之一,也在全球恶性肿瘤中死亡率排第二。据统计，早期结直肠癌患者的5年生存率为90％以上，而晚期IV期患者的仅略高于10％。因此，在早期阶段诊断结直肠癌对于降低其死亡率是至关重要的。尽管筛查策略逐渐发展，诸如结肠镜检查，粪便隐血检测和粪便DNA检测，但是CRC的早期诊断仍然存在很多问题。目前，越来越多的研究者关注无创性生物标志物，目前最常用的血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)和碳水化合物抗原19-9(CA19-9)对早期CRC诊断的敏感性和特异性非常有限。因此，寻求新的特异性和非侵入性的生物标志物对CRC早期诊断是很有必要的。

炎症在CRC疾病进展中起关键性因素。许多流行病学研究报道炎性肠病患者高发CRC。趋化因子和细胞因子在恶性肿瘤发展中起重要作用。趋化因子属于低分子量细胞因子的超家族，主要来源于肿瘤相关的白细胞或肿瘤细胞，根据4个保守的半胱氨酸残基中的前2个可分为4个主要家族(CC，CXC，CX3C和C)，其中最大的亚家族是CXC和CC家族。两者主要通过调控白细胞的趋化及肿瘤细胞的生物学特性参与调节急性和慢性炎症和肿瘤发生发展。趋化因子CC配体20(CCL20)也称为巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP3α)，是已知与G蛋白偶联的7-跨膜受体CCR6相互作用的唯一趋化因子。越来越多的证据表明CCL20对淋巴细胞具有显著的趋化性。有文献报道在一些炎性疾病和癌症中CCL20的表达增加，并且与肿瘤进展有关。然而，CCL20在血清中的诊断和预后价值尚不清楚。

白介素家族与肿瘤微环境中的炎症反应密切相关。IL17A由活化的CD4⁺T细胞(Th17)的亚型以及一些CD8⁺T细胞和γδT细胞产生。已经有文章报道它参与多种恶性肿瘤的侵袭。研究表明IL17A在结直肠癌进展中起主要作用。血清IL17A高表达与CRC患者的无进展生存期缩短及小细胞肺癌患者的肿瘤播散显着相关。迄今为止，还没有关于IL17A在特异性诊断结直肠癌患者的报道。

据报道，IL17A促进肿瘤细胞分泌CCL20。CCL20促进Th17细胞向肿瘤组织的募集，肿瘤微环境中各种因素进一步诱导IL17A的分泌。因此，CCL20可能与IL17A密切相关。目前联合这两种指标进行疾病的诊断评估未见报道。

发明内容

本发明主要提供了一种结直肠癌血清标志物、表达评估方法、试剂盒及应用，通过对CCL20和IL17A两种炎症因子的联合检测，可以对结直肠癌患者及早作出判断，并能有效评估预后，从而为后续的及时干预治疗提供方便。其技术方案如下：

一种结直肠癌血清标志物，其为CCL20趋化因子和IL17A细胞因子。

一种人结直肠癌检测试剂盒，其包括CCL20趋化因子和IL17A细胞因子。该试剂盒可用于检测结直肠癌血清标志物表达水平。

一种结直肠癌血清标志物的ELISA表达评估方法，其中CCL20趋化因子和IL17A细胞因子分别采用下述方法评估：

(1)将1×Capture antibody加入到平底酶标孔板中，封口膜密封后包被16-20h；

(2)取出包被板，甩干并加入Wash buffer洗板；

(3)甩干后，加入1×Assay diluent，室温孵育，孵育结束后，甩干并加入Washbuffer洗板；

(4)甩干后，加入待测血清，室温孵育，孵育结束后，甩干并加入Wash buffer洗板；