[发明专利]抗海蛇神经毒素SN160的纳米抗体、制备方法及用途

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，提供了一种抗海蛇神经毒素SN160的纳米抗体、制备方法及应用，该抗海蛇神经毒素SN160的纳米抗体为VHH抗体，具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，编码该纳米抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，通过亲和力分析本发明的纳米抗体具有良好的亲和力，通过小动物实验证明，预先注射本发明纳米抗体的抗体保护组小鼠在注射海蛇神经毒素SN160后，无任何小鼠出现神经中毒症状，连续观察一个月无毒素致死情况，说明本发明的纳米抗体具有优良的抗海蛇毒素的作用，对海蛇咬伤具有优良的预防或治疗作用，具备广阔的临床应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种抗海蛇神经毒素SN160的纳米抗体、其制备方法和用途，尤其是在制备海蛇抗毒制剂以及在治疗或预防海蛇咬伤方面的用途。

背景技术

自进入新时代以来，我国海洋事业不断推进，养殖捕捞、海洋资源利用与研究等发展迅速；并且作为海洋大国，我国要建设世界一流海军，也需要不断加强海军建设。然而在沿海海域存在的有毒有害的海洋生物，会对生产作业的渔民、海洋资源开发者、研究员和海军战士等存在潜在威胁。因此海洋生物伤的防治研究工作对于人民的生产、科学研究、部队训练的卫勤保障和医疗工作有重大意义，所以必须尽快着手开展抗海洋生物伤的科学应用研究。

平颏海蛇是一种典型的有毒海洋生物，属眼镜蛇科，俗名棘海蛇，平颏海蛇咬伤事件时常发生。目前对海蛇咬伤的治疗措施主要为排出毒液、减少毒液吸收和抗毒治疗等。虽然最有效的急救治疗措施是尽早注射特种抗毒血清或抗体药物等抗毒制剂，但目前特种抗毒血清等抗毒制剂主要来源于免疫动物，而直接使用蛇毒毒素免疫动物的方法来获得抗毒血清或筛选多/单克隆抗体的方法具有许多缺点：一是海蛇捕捉困难，难以获得大量的天然海蛇毒素进行动物免疫，从毒腺中分离神经毒素远不能满足制备抗毒制剂的需要。二是由于蛇毒毒素对动物具有致死性，因此需要进行减毒处理，而减毒毒素往往会丢失其抗原性及表位，导致利用减毒毒素制备的抗毒素中和活性减弱。三是动物来源的抗毒血清等制品容易引起患者强烈的过敏反应，甚至死亡。因此，海蛇毒素的抗毒血清制备困难且质量不稳定，世界上仅有少数国家能常备有海蛇抗毒制剂。

随着分子生物学的发展，采用基因工程的方法制备蛇毒毒素的技术已经成熟，能够开展蛇毒毒素的生物合成及并在此基础上进行抗蛇毒抗体的制备研究。前期本团队已经利用基因工程方法完成了三种海蛇神经毒素的重组表达。获得了大量海蛇毒素，使筛选针对毒素的特异性抗体药物成为可能。

由于抗体能够高效、特异地与体内和体外的各种抗原蛋白结合，使得抗体不仅能应用于调节免疫系统功能，还可以应用于各种高灵敏的检测方法。目前，抗体药物是生物技术药物最重要的组成部分，抗体试剂也是医学诊断和生物学研究中最常用到的试剂之一。因此，抗体相关的生物产品具有极高的应用前景和商业价值。抗体可以通过多种途径获得，例如：动物或人的血液、细胞培养、注射杂交瘤细胞的鼠的腹水等，但这均需要有效的方法进行纯化，以获得具有应用价值的抗体产品。目前最常用的抗体纯化方法是利用特殊蛋白质与抗体的Fc片段之间的高亲和力进行亲和层析。在进行抗体产品的工业生产的过程中亲和层析是其中最为关键的一步，也是整个生产中耗费最高的部分。

针对上述问题，纳米抗体应运而生，纳米抗体是来源于骆驼科动物或软骨鱼的特殊抗体。研究表明，骆驼体内存在一种天然缺失轻链只含重链的抗体，称为重链抗体。克隆重链抗体的可变区可得到只由一个重链可变区组成的单域抗体，称为VHH抗体。VHH抗体的晶体直径仅有2.5nm，长4nm，因此又被称为纳米抗体。纳米抗体的大小只有传统IgG型抗体的十分之一，是天然存在的可与抗原结合的最小片段。纳米抗体能被单基因编码，可以很容易的利用微生物进行生产，并具有很高的产率。但目前尚未见针对海蛇神经毒素SN160的纳米抗体的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于，依托上述研究背景，研究抗海蛇神经毒素SN160的纳米抗体、制备方法和用途，即提供了一种抗海蛇神经毒素SN160的纳米抗体、其制备方法和用途。