[发明专利]一种热稳定性提高的L-天冬氨酸-α-脱羧酶有效
| 申请号： | 201811131112.5 | 申请日： | 2018-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN109055346B | 公开（公告）日： | 2020-12-29 |
| 发明（设计）人： | 周哲敏;刘中美;刘宇峰;周丽;崔文璟;郭军玲;王超;薛岚 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 热稳定性 提高 天冬氨酸 脱羧酶 | ||
1.一种热稳定性提高的L-天冬氨酸-α-脱羧酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。
2.编码权利要求1所述的一种热稳定性提高的L-天冬氨酸-α-脱羧酶的基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
3.携带权利要求2所述基因的载体、细胞、转化体。
4.制备权利要求1所述的一种热稳定性提高的L-天冬氨酸-α-脱羧酶的方法，其特征在于，根据SEQ ID NO.5所示的基因序列，设计定点突变引物，对基因进行定点突变，获得核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的基因，并在大肠杆菌中进行表达。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，以大肠杆菌(Escherichia coli)BL21为表达宿主。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，以pET 28a(+)为表达载体。
7.根据权利要求4-6任一所述的方法，其特征在于，具体步骤包括：
(1)通过全质粒pcr得到核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的L-天冬氨酸α-脱羧酶基因与pET 28a(+)表达载体相连的质粒；
(2)将pcr产物经DpnI消化后，通过热激法转入大肠杆菌JM109中；
(3)挑取转化后的单克隆菌落，35-40℃，200-220rpm摇菌12-16h，提取重组质粒；
(4)将重组质粒转化到大肠杆菌BL21表达。
8.一种重组大肠杆菌，其特征在于，以大肠杆菌(Escherichia coli)BL21为表达宿主，以pET 28a(+)为载体，表达如SEQ ID NO.2所示的L-天冬氨酸-α-脱羧酶。
9.权利要求1所述的L-天冬氨酸-α-脱羧酶在制备β-丙氨酸中的应用。
10.权利要求8所述的重组大肠杆菌在制备β-丙氨酸中的应用。
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