[发明专利]一种7β-羟基类固醇脱氢酶突变体、编码序列、重组表达载体、基因工程菌及应用有效
| 申请号： | 201811135213.X | 申请日： | 2018-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN109182284B | 公开（公告）日： | 2020-12-04 |
| 发明（设计）人： | 黄斌;周晶辉;赵强;许岗 | 申请（专利权）人： | 湖南福来格生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P33/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 长沙市融智专利事务所(普通合伙) 43114 | 代理人： | 袁靖 |
| 地址： | 410000 湖南省长*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 羟基 类固醇 脱氢酶 突变体 编码 序列 重组 表达 载体 基因工程 应用 | ||
1. 一种7β-羟基类固醇脱氢酶突变体，其特征在于，是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第 175 位的谷氨酸突变成天冬氨酸；该突变体命名为Ca7β-1，其氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示。
2.一种7β-羟基类固醇脱氢酶突变体，其特征在于，是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第 175 位的谷氨酸和第197位的天冬酰胺均突变成天冬氨酸，该突变体命名为Ca7β-2，其氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
3.一种编码7β-羟基类固醇脱氢酶突变体的基因序列，其特征在于，为编码权利要求1或2所述的7β-羟基类固醇脱氢酶突变体中的任一种的基因序列。
4.含有权利要求3所述编码基因中的一种或几种的重组表达载体。
5.含有权利要求4所述重组表达载体中的一种或几种的基因工程菌。
6. 7β-羟基类固醇脱氢酶突变体的应用，其特征在于，使用权利要求1或2所述的7β-羟基类固醇脱氢酶突变体催化7-酮石胆酸制备熊去氧胆酸。
7. 7β-羟基类固醇脱氢酶突变体的应用，其特征在于，使用权利要求1或2所述的7β-羟基类固醇脱氢酶突变体催化牛磺-7-酮石胆酸制备牛磺熊去氧胆酸。
8.根据权利要求6或7所述7β-羟基类固醇脱氢酶突变体的应用，其特征在于，催化反应中用到的辅酶NADPH是由葡萄糖脱氢酶催化葡萄糖合成得到的，反应完后NADPH转变成NADP+，NADP+在葡萄糖脱氢酶催化下转变成葡萄糖酸，从而实现辅酶NADPH的循环再生。
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