[发明专利]携带特异miRNA靶序列的重组寨卡病毒及其应用

说明书

本发明涉及重组病毒领域，公开了一种DNA分子与重组寨卡病毒和它们的用途。所述DNA分子含有串联连接的5’非编码区序列、结构蛋白编码序列、非结构蛋白编码序列、和插入有miRNA靶序列的编码序列3’非编码区序列，其中，所述5’非编码区序列、结构蛋白编码序列、非结构蛋白编码序列和3’非编码区序列来源于寨卡病毒；所述miRNA为神经系统特异性miRNA，所述miRNA靶序列可以为多种miRNA靶序列的串联。本发明还公开了上述DNA分子的相关用途。重组病毒在神经系统中具有明确的减毒特征，可作为寨卡病毒疫苗，对于预防寨卡病毒感染具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及重组病毒领域，具体地，涉及一种携带特异miRNA靶序列的重组寨卡病毒及其应用。

背景技术

寨卡病毒(Zika Virus，ZIKV)是单股正链RNA病毒，病毒颗粒直径约50nm，与日本脑炎病毒、登革病毒、西尼罗病毒等同属黄病毒科黄病毒属。寨卡病毒基因组长约为10.7kb，包括5’和3’非编码区以及一个单一开放读码框。该开放读码框编码3种结构蛋白(C、pr/M、E)和7种非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)。寨卡病毒病是由寨卡病毒引起的一种蚊媒病毒病，主要通过伊蚊进行传播。2015年以后，拉丁美洲寨卡病毒病暴发，同时伴随大量新生儿出现小头症。2016年2月1日，世界卫生组织(WHO)将其列为全球关注的突发公共卫生事件。目前，国内外尚无有效的疫苗和药物可以预防和治疗寨卡病毒病。

减毒活疫苗是一种重要的疫苗类型，它可以全面激活体液和细胞免疫应答反应，使机体获得更广泛持久的免疫保护。近年来，microRNA(miRNA)介导的靶向减毒策略在病毒疫苗研究领域中取得了突破性进展，其主要机制是将组织细胞内特异表达的miRNA的靶序列插入到病毒基因组中，利用组织内特异的miRNA靶向降解病毒基因组，抑制病毒在该组织中的复制，进而降低或消除病毒在特定组织的增殖和致病效应。这一策略保留病毒免疫原性的同时又可降低病毒致病性，为研制新型减毒活疫苗提供了重要手段。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的上述不足，提供一种特异降低寨卡病毒组织嗜性的方法及其用途。

寨卡病毒具有明显的神经嗜性和神经毒力，特别是能够特异感染神经前体细胞，导致胚胎脑中神经干细胞的增殖与分化异常，造成神经元大量死亡，引起小头症。因此，如果将脑组织特异表达的miRNA靶序列插入寨卡病毒基因组，将能够抑制寨卡病毒在脑组织中的复制，显著降低寨卡病毒神经毒力和导致小头症的发生风险，并可作为下一代更为安全的寨卡减毒活疫苗。

因此，为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种DNA分子，该DNA分子含有串联连接的5’非编码区序列、结构蛋白编码序列、非结构蛋白编码序列、和插入有miRNA靶序列的编码序列的3’非编码区序列，其中，所述5’非编码区序列、结构蛋白编码序列、非结构蛋白编码序列和3’非编码区序列来源于寨卡病毒；所述miRNA靶序列的编码序列能够抑制寨卡病毒的增殖。

第二方面，本发明提供了一种重组质粒，该重组质粒含有如上所述的DNA分子。

第三方面，本发明提供了一种重组寨卡病毒，该重组寨卡病毒的基因组RNA对应的cDNA序列与如上所述的DNA分子的序列相同。

第四方面，本发明提供了一种构建重组寨卡病毒的方法，该方法包括：在寨卡病毒的基因组RNA的3’非编码区插入miRNA靶序列，使得重组寨卡病毒在神经系统中的复制能力低于插入miRNA靶序列前的寨卡病毒。

第五方面，本发明提供了如上所述的DNA分子、重组质粒和重组寨卡病毒中的至少一种在制备用于预防寨卡病毒感染的疫苗中的用途。