[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA试剂盒的制备及应用

权利要求书

1.一种猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA检测试剂盒，其中，所述试剂盒包括包被了猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物的支持介质，所述猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物为猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体-灭活抗原复合物，酶标记的抗猪IgA二抗，以及用于对猪IgA和所述猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物抗原抗体反应进行检测的检测试剂、阳性对照、阴性对照；优选地，所述猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体为8A3A10、PEDV-McAB1或PEDV-McAB2。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述灭活抗原为CV777株、HN1301株、HN1302株、HN1303株，Iowa18984株、AJ1102株、ZJ08株、LW/L株、SD10株或其培养物的灭活抗原；

所述灭活抗原通过先离心后灭活制备；优选地，所述离心条件为5000～15000转/分钟离心5～30分钟，所述灭活步骤为甲醛灭活、或β-丙内酯灭活，甲醛浓度范围0.05％～0.5％(v/v)，25～37℃静置或摇床50～200转/分钟，灭活时间24～48小时；β-丙内酯(β-PL)BPL灭活，BPL浓度范围0.01％～0.05％，灭活时间8～16小时。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中，所述猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体8A3A10包被量为30～1000ng/孔；优选地，所述猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体8A3A10包被量为50～500ng/孔；更优选地，所述猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体8A3A10包被量为50～300ng/孔；

所述HN1301株灭活抗原添加量为10～160μg/孔；优选地，所述HN1301株灭活抗原添加量为20～120μg/孔；更优选地，所述HN1301株灭活抗原添加量为20～80μg/孔。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述酶标记的抗猪IgA二抗为辣根过氧化物酶标记的抗猪IgA二抗；优选地，所述酶标记的抗猪IgA二抗为酶标记的羊猪IgA二抗，所述对猪IgA和所述猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物抗原抗体反应进行检测的检测试剂为显色剂A液和显色剂B液，所述显色剂A液为1L水中含有磷酸氢二钠14.7g、柠檬酸9.3g、过氧化脲0.3g，所述显色剂B液为1L水中含有四甲基联苯二胺(TMB)0.2g，无水乙醇100ml；

所述试剂盒还包括终止液，所述终止液为2M H₂SO₄溶液。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述试剂盒的反应体系为含有BSA、或OVA、或脱脂奶、或驴血清、或羊血清、或胎牛血清的磷酸盐缓冲液；优选地，所述反应体系中为含15％～25％胎牛血清的PBS溶液。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括样品稀释液、洗涤液，所述样品稀释液为含BSA、或OVA、或脱脂奶、或驴血清、或羊血清、或胎牛血清的磷酸盐缓冲液；所述洗涤液为磷酸盐缓冲液。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述阳性对照为经IPMA方法鉴定IgA抗体为阳性的血清、乳汁、唾液、肛拭子、粪便；所述阴性对照为经IPMA方法鉴定IgA抗体为阴性的血清、乳汁、唾液、肛拭子、粪便。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述支持介质为微量滴定板。

9.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述试剂盒检测样本选自乳汁、血清、唾液、肛拭子、粪便样品。