[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA试剂盒的制备及应用

说明书

本发明提供了一种猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA检测试剂盒，其中，该试剂盒包括包被了猪流行性腹泻病毒抗体‑抗原复合物的支持介质，该猪流行性腹泻病毒抗体‑抗原复合物为猪流行性腹泻病毒IgG单克隆抗体‑灭活抗原复合物，酶标记的抗猪IgA二抗，以及用于对猪IgA和该猪流行性腹泻病毒抗体‑抗原复合物抗原抗体反应进行检测的检测试剂、阳性对照、阴性对照。本发明的试剂盒灵敏度高，能对乳汁、血清、唾液、肛拭子、粪便样品多中靶标样品就进行准确检测。

技术领域

本发明涉及一种猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA试剂盒的制备 及应用，属于免疫测定法领域。

背景技术

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由猪流行性腹 泻病毒(PEDVirus，PEDV)引起猪的一种高度接触性、病毒性肠道传 染病，以水样腹泻、呕吐、脱水、食欲下降及哺乳仔猪的高死亡率为特 征。该病对各种年龄阶段的猪均易感，哺乳仔猪、架子猪、育肥猪的发 病率达100％，尤以哺乳仔猪最为严重，病死率达100％。

实践中，血清学检测仍是临床诊断及免疫评价的常用方法。目前 PEDV抗体检测技术主要集中在血液中PEDV IgG抗体水平的检测，而 临床检测发现，尽管疫苗免疫后血清中存在较高水平的PEDV IgG抗体， 猪群仍时常发生PED。因此，传统检测血清中的PEDV IgG抗体水平不 能真实反映PEDV疫苗的免疫保护状况。PEDV引起的免疫应答主要以 肠道黏膜免疫为主，粘膜免疫系统主要是通过产生分泌型IgA(sIgA) 和IgM发挥作用，对于肠道病毒来说，IgA是病原体感染后肠道粘膜产 生最多的抗体类型，也是阻止病原体入侵肠道的重要防线，在机体抗感 染免疫中发挥重要作用。因此，猪体内PEDV IgA抗体水平更能反应机 体被PEDV感染情况或疫苗免疫保护效力。

目前，对于IgA的检测仍存在一定难度，国内外尚缺乏标准的PEDV IgA检测技术和产品。目前国内商品化产品仅有韩国安捷生产的PEDV IgA抗体ELISA检测试剂盒，但该试剂盒只能检测母猪的乳汁，特别的 问题是，母猪在哺乳期间采集到乳汁困难，乳汁质量还需检验。由于不 能使用其检验血液等样品，因此仅能间接、模糊评价仔猪群的免疫效果， 不能直接评价各仔猪的免疫效果；也不能评价临床PEDV的感染情况， 无法进行流行病学监测。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了一种可检测多种靶标的猪 流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA检测试剂盒，特别地，试剂盒灵敏 度较高、特异性良好。

本发明涉及一种猪流行性腹泻病毒IgA抗体ELISA检测试剂盒， 其中，所述试剂盒包括包被了猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物的 支持介质，所述猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物为猪流行性腹泻 病毒IgG单克隆抗体-灭活抗原复合物，酶标记的抗猪IgA二抗，以 及用于对猪IgA和所述猪流行性腹泻病毒抗体-抗原复合物抗原抗体 反应进行检测的检测试剂、阳性对照、阴性对照。

作为本发明的一种实施方式，所述猪流行性腹泻病毒IgG单克 隆抗体为8A3A10、PEDV-McAB1或PEDV-McAB2。

所述猪流行性腹泻病毒单克隆抗体8A3A10，由小鼠骨髓杂交瘤 细胞8A3A10分泌表达，其中杂交瘤细胞8A3A10株保藏号为CCTCC No:C2014197，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中 国武汉市武汉大学，保藏日期为2014年11月3日，参见中国专利CN104694480A。

所述猪流行性腹泻病毒单克隆抗体PEDV-McAB1， PEDV-McAB2，公开于中国专利CN105461805A。

作为本发明的一种实施方式，所述灭活抗原为CV777株、 HN1301株、HN1302株、HN1303株，Iowa18984株、AJ1102株、ZJ08 株、LW/L株、SD10株或其培养物的灭活抗原；所述灭活抗原通过先 离心后灭活制备。