[发明专利]一种捕获特定微量细胞的装置及其制作和使用方法

说明书

本发明公开了一种捕获特定微量细胞的装置和该装置的制作及使用方法，该装置包括磁珠，连接核酸，含多拷贝适配体的长链核酸；磁珠通过亲和素‑生物素的结合方式或生物素‑链霉亲和素将连接核酸固定在磁珠上，连接核酸由重复序列的天然或化学修饰的核苷酸组成，其作用为连接磁珠和含多拷贝适配体的长链核酸，所述含多拷贝适配体的长链核酸是由多个单价核酸适配体和与连接核酸互补的间隔序列组成，具有捕获特定细胞的作用。相较于现用的微量细胞捕获方法，本发明装置操作简单，成本低，可重复利用；捕获细胞能力强，灵敏度，效率和纯度方面明显提高；灵活性强，所捕获的细胞能从磁珠上释放，且对细胞无损伤，可进行再培养和后续的细胞生物学实验。

技术领域

本发明涉及细胞捕获技术领域，具体来说，涉及一种捕获特定微量细胞的装置和该装置的制作和使用方法。

背景技术

微量细胞的传统分离方法是流式细胞术和荧光激活细胞分离术(Fluorescenceactivated cell sorting,FACS)，这种基于荧光探针标记抗体来捕获CTCs的方法具有成本高，操作复杂，耗费时间长等缺点，在临床应用上受到了较大的限制。强生公司的Cell-Search系统是最早应用于循环肿瘤细胞分离的设备，也是目前唯一获FDA批准应用于临床的循环肿瘤细胞检测设备。但是，这种基于免疫磁珠捕获的方法具有成本高、准确性差，灵敏度较低的缺点，在临床上的推广和应用受到了较大的争议。因此，如何提高极微量的特异细胞的捕获和富集的纯度和灵敏度是如今面临的最大挑战之一。与抗体相比，核酸适配体与靶标结合具有很高的亲和力，可以提高检测的灵敏度，并具有热稳定性好，无免疫原性，容易进行化学修饰，成本低，灵活性强的优势，因此近年来大量应用于肿瘤诊断的设计和细胞捕获的应用中。但基于核酸适配体的捕获效率，以及核酸适配体与磁珠(或其它基质)结合后的空间位阻问题仍然是现今阶段中迫切需要解决的问题之一。专利CN102719353 B公开了一种用于外周血中循环癌细胞的特异性捕获的装置及方法，该专利的核酸适配体固定可一次性完成，可以实现对目标癌细胞高选择性和高特异性的捕获；但该专利捕获方法需要额外的仪器设备，在操作中可能对细胞有一定损伤；专利201611122625.0公开了一种高效捕获细胞的方法，其包括磁珠的活化、磁珠的修饰、免疫磁珠的制备以及特定细胞的捕获与分离富集，其通过使用特定的长链化合物进行修饰，形成的长链复合物具有立体网状结构，增加了抗体和细胞结合的效率，该专利通过增加链长，从而减少空间位阻，来增加细胞捕获的效率，但其需要在磁珠-长链化合物偶联抗体，通过抗体与特定细胞表面的抗原发生反应，从而实现对特定细胞的捕获，但该种方法成本高、准确性差，灵敏度较低、灵活性不够强；专利201710739689.3公开了一种肺癌肿瘤细胞捕获与活性检测、分析方法及其应用，其采用负向富集肺癌CTCs的基础上，通过对肺癌CTCs的捕获，捕获在滤膜上，通过联合检测细胞核形态与三种特定的mRNAs的表达量来识别肺癌CTCs，并对每例血液样本中捕获的疑似CTCs进行细胞核大小和形态学特征分析，结合TTF1 mRNA和pan-CK mRNA鉴别是否为TTF1阳性肺癌CTCs，进而依据MKI67 mRNA表达是否阳性将其归类为有增殖活性的TTF1阳性肺癌CTCs或无增殖活性的TTF1阳性肺癌CTCs。该方法操作复杂，耗费时间长，且捕获的纯度没法保证。

因此，急需研究出一种操作简单、灵活性和效率高的特定细胞捕获装置。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处，本发明提供一种捕获特定微量细胞的装置和该装置的制作方法，该装置制作方法简单，成本低，可重复多次使用；该装置提高细胞捕获的灵敏度和效率，提高灵活性，使捕获后的细胞能够重新释放出来进行后续应用。

为实现上述目的，所采取的技术方案：

一种捕获特定微量细胞的装置，包括磁珠、连接核酸、含多拷贝适配体的长链核酸；所述连接核酸一端固定在磁珠表面，另一端以碱基互补的形式连接含多拷贝适配体的长链核酸，所述连接核酸由天然或化学修饰的核苷酸组成，所述含多拷贝适配体的长链核酸是由多个单价核酸适配体和与连接核酸互补的间隔序列组成的单链核酸。